《DON 毒素在雞體內關鍵代謝酶的篩選鑑定及作用機制》是依託華南農業大學，由陳慶梅擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：DON 毒素在雞體內關鍵代謝酶的篩選鑑定及作用機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：陳慶梅
- 依託單位：華南農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
DON毒素是一種毒性極強的黴菌次生代謝產物，其污染普遍，已給畜牧業發展及人類健康造成了很大的危害。研究發現某些畜禽腸道微生物能將DON代謝成幾乎無毒的脫環氧產物DOM-1。由於DON脫環氧代謝腸道微生物對生長環境要求苛刻，在飼料脫毒等方面的套用受到一定限制，迫切需要進一步分離其脫環氧代謝的關鍵酶。然而，已被分離的DON脫環氧代謝微生物均受國外專利保護，對我國的科研和生產套用造成了障礙。在前期研究中，通過對雞腸道微生物的篩選，已初步獲得DON脫環氧代謝菌株6株。本研究擬對這6株菌株做進一步鑑定，以期獲得具有自主智慧財產權的DON 脫環氧代謝微生物。並在此基礎上，通過構建酵母YZAS107 表達文庫與重組蛋白的酶活性分析等方法來篩選和鑑定DON脫環氧代謝關鍵酶，並初步探討其作用機制。本研究對深入認識DON 脫環氧代謝的生化機制具有重要的理論意義，可為DON毒素脫毒酶製劑的開發提供理論依據。
結題摘要
脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（Deoxynivalenol），簡稱DON毒素，是由禾穀鐮刀菌等真菌產生的次級代謝產物。DON毒素是黴菌毒素中污染糧食等作物最普遍的一種單端孢霉烯族B族毒素。生物脫毒是目前解決DON污染糧食作物的一種最有前景的方法。 本項目從雞腸道中分離篩選可以將DON毒素代謝轉化為低毒的脫環氧產物deepoxy-DON（簡稱DOM-1）的微生物。通過聯合使用四環素、氨苄青黴素、泰樂黴素、林可黴素四種抗生素，梯度稀釋，96孔板篩選等方法富集具有DON脫環氧代謝能力的菌群。對有活性及無活性的菌群進行比較宏基因組學分析，發現有活性菌群中獨有的Eggerthella和Gordonibacter都屬於Coriobacteriaceae。參考文獻篩選Coriobacteriaceae的方法，改良培養基，連續培養5天，先後長出二批克隆，第二批克隆可以代謝DON毒素為DOM-1。經鑑定，該菌株為革蘭氏陽性菌，其大小約為0.2～0.3 μm × 0.7～1.0 μm，呈細桿狀，無鞭毛。對上述單克隆菌株進行16S rRNA基因測序，並構建系統發育樹，通過序列比對發現，該菌株屬於伊格爾茲氏菌屬（Eggerthella），將該菌株命名為Eggerthella sp. D II-9，該菌株具有DON降解活性pH值範圍廣（5-10）和溫度範圍廣（30-45℃）的特點，且其活性的維持不依賴於培養體系中DON的持續存在。 綜上，本項目篩選出一種新的未經報導的微生物，既可為DON毒素污染的糧食作物脫毒提供候選菌株，也為後續研究脫環氧代謝的機理奠定了基礎。
