能通過水解ATP獲得能量以解開雙鏈DNA的一種酶。這種解鏈酶分解ATP的活性依DNA解鏈蛋白賴於單鏈DNA的存在。如果雙鏈DNA中有單鏈末端或切口,則DNA解鏈酶可以首先結合在這一部分,然後逐步向雙鏈方向移動。複製時,大部分DNA解旋酶可沿滯後模板的5'-〉3'方向並隨著複製叉的前進而移動,只有個別解旋酶沿著3'-〉5'方向移動的。
DNA在複製前不僅是雙螺旋而且處於超螺旋狀態,而超螺旋狀態的存在是解鏈前的必須結構狀態,參與解鏈的除解鏈蛋白外還有一些特定蛋白質,如大腸桿菌中的Dna蛋白等。一旦DNA局部雙鏈解開,就必須有ssbDNA蛋白以穩定解開的單鏈,保證此局部不會恢復成雙鏈。兩條單鏈DNA複製的引發過程有所差異,但是不論是前導鏈還是後隨鏈,都需要一段RNA引物用於開始子鏈DNA的合成。