《Cul2/miR-424反饋環路在HPV E7蛋白致癌過程中的調控作用及機制》是依託浙江大學，由王新宇擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Cul2/miR-424反饋環路在HPV E7蛋白致癌過程中的調控作用及機制
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：王新宇
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
宮頸癌是最常見的女性惡性腫瘤之一。我們已在Oncogene上發文首次證明miR-424是一個腫瘤抑制性miRNA。前期研究又發現， Cul2是miR-424的下游靶基因，Cul2又可反饋性負向抑制miR-424表達，提示可能存在miR-424-Cul2-轉錄因子-miR-424反饋性調控環路。本項目通過細胞模型，利用免疫共沉澱和質譜分析等多種分子生物學技術，首先明確miR-424對下游靶基因Cul2的負向調控及Cul2對E7功能的影響；然後確定特定的轉錄因子、並證實Cul2對轉錄因子和轉錄因子對miR-424的直接轉錄調控作用，從而證明反饋環路的存在。旨在從miRNA介導的信號通路揭示宮頸癌發病的關鍵機制。
結題摘要
我們前期研究已經證實miR-424在宮頸癌發生髮展過程中發揮抑癌功能，但對宮頸癌miR-424持續性低表達的原因並不清楚。宮頸癌作為病毒相關腫瘤，已知HR-HPV E7蛋白可干擾抑癌蛋白Rb與轉錄因子E2F的結合而導致細胞增殖周期的紊亂，這一反應被認為是E7轉化活性的關鍵。本研究首先通過軟體預測發現轉錄因子E2F1在miR-424轉錄起始位點上游2000bp內有2個可能識別位點。在此基礎上我們利用螢光素酶報告基因檢測、染色質免疫共沉澱和qRT-PCR證實E2F1是miR-424的直接上游分子，抑制miR-424的表達。其次，我們通過預測軟體、qRT-PCR、western blot和螢光素酶報告基因檢測發現Cul2是miR-424的直接下游靶基因，miR-424低表達導致Cul2高表達。同時，我們又發現Cul2也能反饋抑制miR-424的表達。因此，推測Cul2與miR-424之間可能存在反饋環路。進一步研究發現，高表達Cul2能夠正向調控E2F1的表達，免疫共沉澱實驗顯示Cul2能夠與E2F1結合，從而證明Cul2、E2F1和miR-424之間調控環路的存在。在此基礎上，我們進一步對Cul2和E2F1的生物學作用如細胞增殖、細胞周期和細胞凋亡進行深入研究， 繼而對Cul2/E2F1/miR-424調控環路進行全面的功能驗證。通過本項目研究，明確了宮頸癌細胞中Cul2/E2F1/miR-424調控環路的存在，並對環路成員進行了功能探討，取得了較好的實驗成果，揭示了導致宮頸癌細胞miR-424持續性表達抑制的原因，並從miRNA層面為發現能夠阻斷宮頸癌發生的新靶點提供了實驗依據。本項目按要求完成，參加國際學術交流並進行大會報告1次，培養博士研究生和碩士研究生各1名，並資助研究團隊成員赴美國進行交流訪問。
