基本介紹
- 中文名：CTAB法
- 外文名：hexadecyltrimethylammonium bromide
- 用途：主要用於提取生物DNA
- 性質：陽離子去污劑
全稱,用途,步驟,
全稱
CTAB法的全稱是十六烷基三甲基溴化銨法（cetyltrimethylammonium Ammonium Bromide）。
用途
主要用於提取生物DNA
步驟
（1） 2%CTAB抽提緩衝液在65℃水浴中預熱。
（3） 加入700ul的2%CTAB抽提緩衝液，輕輕攪動；
（4） 將磨碎液分倒入1.5 ml的滅菌離心管中，磨碎液的高度約占管的三分之二；
（5）置於65℃的水浴槽或恆溫箱中，每隔10 min輕輕搖動，30~60min後取出；
（6）冷卻2 min後，加入氯仿-異戊醇（24：1）至滿管，劇烈振盪2~3 min（若提取的是總基因組，則不能劇烈震盪。），使兩者混合均勻；
（7）放入離心機中10 000 rpm離心10 min，與此同時，將600 ul的異丙醇加入另一新的滅菌離心管中；
（8） 10 000 rpm離心1 min後，移液器輕輕地吸取上清夜，轉入含有異丙醇的離心管內，將離心管慢慢上下搖動30 sec，使異丙醇與水層充分混合至能見到DNA絮狀物；
（9）10000 rpm離心1 min後，立即倒掉液體，注意勿將白色DNA沉澱倒出，將離心管倒立於鋪開的紙巾上；
（10）60 sec後，直立離心管，加入720ul的75%乙醇及80 ul 5 M的醋酸鈉，輕輕轉動，用手指彈管尖，使沉澱與管底的DNA塊狀物浮游於液體中；
（11）放置30 min，使DNA塊狀物的不純物溶解；
（12）10000 rpm離心1 min後，倒掉液體，再加入800 ul 75%的乙醇，將DNA再洗 30 min；
（13）10000 rpm離心30 sec後，立即倒掉液體，將離心管倒立於鋪開的紙巾上；數分鐘後，直立離心管，乾燥DNA（自然風乾或用風筒吹乾）；
（14）加入50 ul 0.5 × TE(含RNase)緩衝液，使DNA溶解，置於37℃恆溫箱約15 h，使RNA消解；
以上為通用CTAB法,實驗時可根據不同材料加以改進,以獲得最佳實驗結果.
