《CSM4B骨骼肌前體細胞移植治療失神經骨骼肌萎縮》是依託復旦大學，由徐建光擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：CSM4B骨骼肌前體細胞移植治療失神經骨骼肌萎縮
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：徐建光
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
失神經支配的骨骼肌出現的不可逆性萎縮一直是手外科領域的難題。根據細胞移植和骨骼肌衛星細胞的研究進展，本課題擬用螢光激活細胞分選法，免疫組化，細胞移植和電生理等方法，首先完成GFP轉基因大鼠CSM4B（ CD45-Sca_1-Mac_1-CXCR4+β1_integrin+）細胞的分離、純化,將高度純化的CSM4B細胞移植入失神經肌萎縮的大鼠體內，觀察對受體大鼠體內骨骼肌細胞、肌衛星細胞的影響，骨骼肌組織學變化，並初步研究神經支配對CSM4B細胞移植的影響。為細胞移植治療失神經骨骼肌萎縮，最終為解決手內在肌萎縮提供可能的方法。並且通過比較正常肌組織和萎縮肌組織中肌衛星細胞的分子調控和基因表達，來初步探討失神經肌萎縮時肌衛星細胞庫耗竭的可能機制。
結題摘要
項目完成情況： 第一部分：大鼠肌衛星細胞的體外培養與鑑定 以成年Wistar大鼠後肢肌為取材組織，採用Ⅰ型膠原酶和胰蛋白酶，以“兩步法”消化分離肌衛星細胞，並採用差速貼壁法純化。觀察體外培養的肌衛星細胞增殖、分化及融合形成肌管的狀態。採用免疫螢光技術,對靜止和激活的肌衛星細胞分別選擇其特徵性標誌物PAX7和MyoD為標誌，對分化肌細胞選擇肌細胞骨架蛋白Desmin和α-SCA為標誌，分別進行細胞鑑定。 第二部分：肌衛星細胞移植與體內分化的觀察 體外培養的肌衛星細胞經純度鑑定之後，以帶e-GFP基因的腺病毒轉染示蹤，並移植至失去脛神經支配之腓腸肌。分別在移植之後1周、2周、4周取材腓腸肌組織，製作連續冰凍切片。螢光顯微鏡下觀察，帶GFP綠色螢光的移植細胞存活、分化及形成肌管的狀態。 第三部分：肌衛星細胞移植延緩失神經肌萎的療效觀察 選取成年Wistar大鼠24隻，於右後肢切斷脛神經，建立失神經肌萎模型。將其隨機分為兩組，其中12隻Wistar大鼠於右側腓腸肌注射肌衛星細胞懸液（移植組），另外12隻僅注射細胞培養液(對照組)。移植4周后，選取移植組與對照組各6隻大鼠，取材雙側腓腸肌，稱肌濕重後，製作石蠟切片，行HE染色與Masson染色，比較肌纖維平均截面積與膠原纖維增生狀態。剩餘大鼠取材右側腓腸肌，製作冰凍切片，行ATP酶組織化學染色,比較移植組和對照組肌組織中ATP酶的含量。 研究結果顯示： 採用Ⅰ型膠原酶和胰蛋白酶聯合消化，並用差速貼壁法純化的方法，可在體外獲得高純度的大鼠肌衛星細胞。體外培養的大鼠肌衛星細胞可在合適條件下分化，並相互融合形成肌管。培養所得細胞在分化前表達靜止期肌衛星細胞特徵性標誌物Pax7，在激活後表達MyoD,在分化後表達肌細胞特有骨架蛋白Desmin(結蛋白)和α-SCA(α橫紋肌肌動蛋白)。外源性肌衛星細胞移植後，可在肌組織記憶體活、分化、相互融合形成肌管。肌衛星細胞移植組的腓腸肌，在肌濕重、肌纖維平均截面積、膠原纖維增生及ATP酶改變各方面，均較對照組有改善，其差異具有統計學意義。 可以得出結論：通過分離消化大鼠肌組織，可在體外獲得高純度的具有成肌能力的肌衛星細胞。將肌衛星細胞移植於失神經支配的骨骼肌，能夠發揮延緩肌肉萎縮的作用。
