《CD40L誘導嚴重燒傷後肺微血管內皮細胞損傷的機理研究》是依託上海交通大學，由郇京寧擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：CD40L誘導嚴重燒傷後肺微血管內皮細胞損傷的機理研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：郇京寧
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
嚴重燒傷所致的急性肺損傷（ALI）治療棘手且死亡率高，因而以肺微血管內皮細胞（PMVECs）為靶目標的防治研究具有重要的臨床套用價值。嚴重創傷後循環中CD40L水平異常增高，但CD40L與傷後ALI是否存在內在關係尚不清楚。我們前期研究發現GEF-H1/RhoA信號通路的活化是血管內皮細胞炎症因子表達以及通透性增加的重要因素之一，而CD40L不僅能上調PMVECs內GEF-H1的表達和cleaved caspase-3水平，而且明顯減少細胞表面Syndecan-1和VE-cadherin的表達。因此本研究推測CD40L與CD40結合後，活化胞內GEF-H1/RhoA信號通路，造成PMVECs屏障完整性和功能損傷，激活炎症和凋亡反應，從而探討CD40L誘導燒傷後ALI的病理生理機制，並調控CD40L功能，以期改善PMVECs損傷，為嚴重燒傷後ALI的防治提供一種新的、潛在的臨床治療手段。
結題摘要
1. 明確CD40L在體內肺組織損傷中的作用和重要地位； 2. 探討GEF-H1/RhoA信號通路在CD40L介導肺損傷中的作用，並將GEF-H1/RhoA信號通路作為干預靶點，以期改善CD40L誘導的肺組織損傷的研究； 【方法】 1. 在成年雄性C57/BL小鼠體內通過HE染色、Evans blue法、稱重等方法，觀察肺 部炎症情況及肺血管通透性的變化，以明確CD40L在小鼠體內誘導肺損傷中的作用和重要地位； 2. ①培養正常HPMVECs，通過蛋白電泳GEF-H1/RhoA/ROCK蛋白表達；蛋白晶片檢測細胞內信號通路活化情況；定量PCR檢測多種炎症因子的釋放、G-LISA法檢測RhoA活性；免疫螢光染色法檢測細胞骨架結構及多種細胞連線蛋白的定位及表達；Transwell法檢測CD40L對單層融合內皮通透性的影響；②利用拮抗劑、RNA干擾技術或特異性抑制劑分別拮抗或下調GEF-H1、RhoA、ROCK以及MAPK(p38、JNK)的表達或者活性，檢測PMVECs通透性、凋亡反應、炎症因子表達的變化； 3. 使用CRE::Cas9雙陽性小鼠，構建NC/GEF-H1/RhoA sgRNA及聯合使用肺高度親和的包裝質粒，包裝AAV病毒，通過尾靜脈注射特異性敲除肺微血管內皮中GEF-H1/RhoA表達；②在NC sgRNA組、GEF-H1 sgRNA組、RhoA sgRNA組中，分別通過氣管注射的方式給予鼠源CD40L的刺激，分別通過HE染色觀察肺部炎症細胞浸潤、Evans Blue法檢測肺血管通透性變化，評估將GEF-H1/RhoA信號通路作為干預靶點以改善CD40L誘導肺微血管內皮損傷的作用； 【結果】 1. CD40L可誘導小鼠急性肺損傷發生； 2. CD40L可誘導HPMVECs中多條信號通路活化，炎症因子表達增加，內皮通透性增加及細胞內凋亡蛋白表達上調； 3. CD40L可活化GEF-H1/RhoA/ROCK信號通路,且通過此通路調控2中的效應； 4. 抑制GEF-H1/RhoA/ROCK信號通路可以減輕CD40L誘導的小鼠急性肺損傷； 【結論】CD40L通過活化GEF-H1/RhoA/ROCK信號通路，介導內皮炎症效應、細胞骨架變化及細胞連線結構破壞，並促進細胞凋亡效應，從而介導cd40l誘導的急性肺損傷效應。
