C3致腎炎因子

概述

C3腎炎因子（C3Nef）是旁路途徑C3轉化酶（C3b，Bb）的一種IgG類自身抗體，C3Nef與C3b、Bb按1∶1∶1比例結合，可以使此酶穩定，免遭C3b-INA和B1H的滅活，從而導致C3和其他補體成分經旁路途徑活化。檢測C3Nef時，一般將正常人血清與待測血清在EGTA存在下共育，如正常人血清中天然C3消耗或轉化為C3裂解產物（C3SP），即說明待測血清中有C3Nef存在。

別名

C3腎炎因子

C3致腎炎因子的醫學檢查

檢查名稱

C3 致腎炎因子

分類

免疫學檢查 > 細胞免疫測定

C3致腎炎因子的測定原理

（1）交叉免疫電泳測定法：將待測血漿加至正常人血漿中，如前者含C3Nef，可使後者中的C3發生裂解。電泳使C3SP與天然C3分開後作交叉電泳可見2個沉澱峰。與對照（應只一個沉澱峰）比較即可判定有無C3Nef。

（2）溶血法：含C3Nef的血清、正常人血清和綿羊紅細胞（SRBC）在含EGTA的緩衝液中共育時，在SRBC上可形成與細胞結合的穩定的C3b、Bb·C3Nef，後者可使隨後加入的大鼠血清中的補體成分活化，導致SRBC溶解。溶血程度與C3Nef量呈正相關。

試劑

（1）交叉免疫電泳測定法：

①0.05mol/L EGTA+0.1mol/L MgCl2：EG-TA（乙二醇雙乙胺醚-N，N-四乙酸）1.9g，MgCl2·6H2O 2.03g，加蒸餾水80ml，60℃加熱並加4mol/L NaOH使溶，校pH為7.45，補加蒸餾水至100ml。

②0.2mol/L EDTA：EDTA-Na2·2H2O 7.4g，配法同EGTA。

③7.5mmol/L EDTA：EDTA-Na2·2H2O 2.79g溶於蒸餾水1000ml中。

④待測和對照血漿：迅速分離血漿後立即測定或－70℃凍存。

（2）溶血法：

①EGTA-VBS：巴比妥0.26g，巴比妥納0.17g，NaCl 3.50g、MgCl2·6H2O 0.40g，EG-TA3.04g加蒸餾水至500ml，調pH至7.4。

②EDTA-VBS：巴比妥2.88g、巴比妥納1.88g、EDTA-Na2 3.79g，明膠1.00g，NaCl 0.85加蒸餾水至1000ml，調pH至7.4。

③2.5%SRBC懸液：SRBC用生理鹽水洗2次，EGTA-VBS洗1次。用前以EGTA-VBS配成2.5%懸液。

④待測血清與正常對照血清：採血後儘快分離，立即檢測或－30℃保存，1周內檢測。

⑤大鼠血清：2～3隻健康大鼠血清混合，分裝，－30℃保存。

操作方法

（1）交叉免疫電泳測定法：按表加樣（表1）。

①將各管置37℃水浴45min，自管3與管4各取出25μl加至管2，混勻。

②澆注含0.35g/L EDTA-Na2的10.0g/L瓊脂糖凝膠3ml於7cm×7cm玻璃板之一邊（寬2cm，可用框架澆注），凝固後於距陰極側1cm、4cm處各打孔一個，分別注入管1、2內容物各10μl。10V/cm電泳1h。取下凝膠板，在空餘的5cm板面上澆注含抗C3血清的10.0g/L瓊脂糖凝膠8ml，使與原先的膠面融合。凝固後與第一次電泳方向垂直，作第二次電泳，3V/cm電泳6～8h。觀察沉澱峰。

（2）溶血法：

①取2.5%SRBC懸液120μl，加待測血清和正常對照血清各40μl，30℃水浴10min後用EDTA-VBS洗5次。

②沉積細胞加入用EDTA-VBS作1∶10稀釋的大鼠血清0.2ml，37℃水浴60min。

③補加EDTA-VBS 1ml後2000r/min離心10min，取上清於412nm測吸光度。

正常值

以>0.128為C3Nef陽性。

化驗結果臨床意義

膜增殖性腎小球腎炎、部分脂肪營養不良（PL）、急性腎小球腎炎、SLE、腦膜炎等可呈陽性。

附註

管1、管2均為單峰時判為陰性。管1為雙峰，管2為單峰為C3Nef陽性。如管2也為雙峰，則可能是試驗過程中C3自然裂解造成的假陽性，也可能是待測血清中已存在有C3裂解產物之故。

相關疾病

脂肪營養不良、急性腎小球腎炎