C2orf40在乳腺癌中的作用及基於TAP-MS技術的作用機制研究

《C2orf40在乳腺癌中的作用及基於TAP-MS技術的作用機制研究》是依託山東大學，由魏光偉擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：C2orf40在乳腺癌中的作用及基於TAP-MS技術的作用機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：魏光偉
• 依託單位：山東大學

中文摘要

抑癌基因失活及功能紊亂是導致乳腺癌發生髮展的主要病理因素之一。我們前期研究觀察到C2orf40的表達與乳腺癌預後密切相關，且體外高表達C2orf40及相應的條件培養液能顯著抑制乳腺癌細胞增殖，但C2orf40在乳腺癌中的作用機制尚不清楚。根據相關文獻和前期結果，我們推測C2orf40抑癌機制可能是以胞外分泌方式，與細胞膜蛋白相互作用而發揮其抑癌作用。本課題擬在前期研究基礎上：①從分子、細胞、基因敲除動物水平系統研究C2orf40在乳腺癌發生髮展中的作用和作用方式；②採用串聯親和純化質譜分析（TAP-MS）等技術分析與C2orf40相互作用的靶蛋白，研究C2orf40抑制乳腺癌的跨膜信號轉導網路；③分析人乳腺癌組織，明確C2orf40在腫瘤組織中的變化及其臨床意義。旨在通過上述實驗驗證我們的假設，揭示乳腺癌發生髮展的新機制，為下一步研究乳腺癌預後預測的新靶標和生物治療的新策略提供依據。

結題摘要

抑癌基因失活及功能紊亂是導致乳腺癌發生髮展的主要病理因素之一。我們前期研究提示C2ORF40 的表達與乳腺癌預後密切相關，且體外實驗證實過表達C2ORF40 或者過表達C2ORF40的乳腺癌細胞培養上清能抑制乳腺癌細胞增殖，但是 C2ORF40 在乳腺癌中的抑癌作用及其機制尚不清楚。根據相關文獻和前期結果，我們推測 C2ORF40抑癌機制可能是以胞外分泌方式，與細胞膜蛋白相互作用而發揮其抑癌作用。在本課題中，我們首先證實了C2ORF40表達水平與乳腺癌患者預後的相關性，高表達C2ORF40的乳腺癌患者生存時間明顯延長。同時我們通過逆轉錄病毒技術成功建立了過表達C2ORF40或C2ORF40沉默的乳腺癌細胞系。在此基礎上，我們首先利用MTT、克隆形成、細胞周期分析等實驗證實過表達C2ORF40能夠抑制細胞的生長及細胞周期M期的進展，同時劃痕實驗、matrigel和transwell實驗揭示了C2ORF40在乳腺癌細胞遷移和侵襲過程的抑制作用。我們還通過沉默C2ORF40的表達水平進一步證實了C2ORF40對乳腺癌細胞增殖、遷移的抑制作用，並經裸鼠成瘤實驗進一步證實了C2ORF40對乳腺癌的抑制作用。在此基礎上我們探索了C2ORF40在乳腺癌表達降低的機制，通過23種乳腺癌細胞系C2ORF40基因啟動子甲基化分析發現多數乳腺癌細胞系C2ORF40基因啟動子存在甲基化，實驗證實C2ORF40啟動子超甲基化是C2ORF40在乳腺癌中表達降低的主要原因。我們同時還探索了C2ORF40的下游靶蛋白，並通過串聯親和質譜分析技術尋找C2ORF40有關的結合蛋白。串聯親和質譜分析發現、免疫共沉澱實驗證實與C2ORF40相關的跨膜蛋白受體，高表達C2ORF40能抑制該跨膜蛋白下游信號通路主要蛋白的激活，依此我們認為C2ORF40是通過受體酪氨酸激酶信號途徑起到抑制乳腺癌細胞增殖的作用。總之，在本課題中我們驗證了C2ORF40與乳腺癌病人預後的關係，並發現C2ORF40啟動子甲基化是其表達降低的原因，證實了C2ORF40抑制乳腺癌細胞增殖，遷移，侵襲的作用，並初步發現C2ORF40可能通過抑制酪氨酸激酶信號途徑來發揮上述作用。