《C1QBP通過調控PKCζ活性調節單核/巨噬細胞的趨化運動》是依託天津醫科大學，由岳丹擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：C1QBP通過調控PKCζ活性調節單核/巨噬細胞的趨化運動
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：岳丹
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
單核/巨噬細胞趨化運動在機體免疫應答和腫瘤發生髮展中發揮重要作用。PKCζ是煮朽煮乘細胞趨化運動途徑中的關鍵分子，但調節PKCζ活性的機制尚不清楚。我們前期研究發現C1QBP沉默可抑制單核/巨噬細胞的趨化運動，降低C1QBP蛋白表達抑制了PKCζ的活化,並且C1QBP與PKCζ免疫共沉降。由此提出府端頸：C1QBP可能通過調控PKCζ的活性來調節單核/巨噬細胞的趨化運動。為驗證您店此假設，本項目將通過體外實驗探討C1QBP對單核/巨噬細胞運動的影響，研究其對PKCζ磷酸化、膜轉位的調控。套用免疫共沉澱檢測C1QBP與PKCζ相互作用，建立小鼠趨化運動模型驗證C1QBP表達下調對單核/巨噬細胞趨化運動的影響。闡明C1QBP在調控單核/巨噬細胞趨化運動中的作用機制，對探討炎症性疾病的發病機理和篩選新的藥物分子有重要意義。
結題摘要
趨化運動是指細胞能夠感受到環境中化學分子的濃度梯度，並且沿著濃度梯度的方向所做的定向運動，它與機體的免疫應答及腫瘤轉移等密切相關。單核/巨噬細胞譽譽寒的趨化運動對炎症、腫瘤等的發生髮展具有重要作用。細胞的趨化運動需要很多蛋白分子參與，它們分布於細胞的不同位置，發揮各自不同的作用。PKCζ是細胞趨化運動途徑中的關鍵分子，且可能是多條趨化運動通路的交匯點，但調節PKCζ活性的機制尚不清楚。C1QBP是一種多功能伴侶蛋白，可以調控PKCζ活化，但在巨噬細胞趨化運動中C1QBP對PKCζ的調控機制尚不清楚。本研究建立了C1QBP降表達的穩定細胞株，經CSF-1、MCP-1及c1q刺激後觀察細胞的趨化運動能力、細胞外基質的黏附能力和細胞骨架重構的變化；共聚焦顯微鏡觀察C1QBP與PKCζ的表達定位；探討PKCζ活化後對下游通路蛋白的影響；體內實驗建立小鼠模型，驗證C1QBP對巨噬細胞趨化運動的影響。通過研究發現：1.體外實驗驗證了C1QBP對單核/巨噬細胞趨的化運動具有調節作用：成功建立了C1QBP降表達的穩定細胞株，C1QBP降表達後單核/巨噬細胞的遷移能力、黏附能力以及肌動蛋白照捆棗聚合能力顯著下降。2.C1QBP對PKCζ的活化及其下游通路蛋白的影響： western blot檢測C1QBP降表達後，CSF-1、MCP-1及c1q誘只船循鑽導的PKCζ磷酸化水平降低；免疫共沉澱實驗證實C1QBP、PKCζ可以相互作用，共聚焦顯微鏡觀察PKCζ與C1QBP共定位在細胞膜和細胞質，顯示PKCζ與C1QBP在細胞中的結合部位；C1QBP 表達沉默後，PKCζ、Tiam1的活化受到抑制，給予PKCζ抑制劑 myristoylated 作用後，CSF-1 誘導的 Tiam1 磷酸化減少；C1QBP降表達抑制CSF-1、MCP-1及c1q誘導的PKCζ下游intergrinβ、coffilin的磷酸化。3. 體內小鼠實驗發現，C1QBP 降表達的巨噬細胞，對腹腔注射趨化因子CSF-1所誘導的趨化運動能力明顯少察市下降。本研究證實C1QBP通過調控PKCζ調節單核/巨噬細胞趨化運動，這對深入探討炎症性疾病的發病機制和探索防治腫瘤的新措施具有重要意義。
