《BACE2活性片段與細胞穿膜肽融合蛋白對APP剪下作用的研究》是依託鄭州大學，由劉希擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：BACE2活性片段與細胞穿膜肽融合蛋白對APP剪下作用的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉希
- 依託單位：鄭州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
AD是最常見的痴呆類型，目前尚無有效治療手段。APP的異常剪下引起有毒性作用的Aβ蛋白在神經元周圍大量沉積形成澱粉樣斑塊是其獨有的病理特徵。BACE2在Aβ結構域內剪下APP，可避免Aβ的生成；阻斷BACE2的降解可使更多的APP通過非澱粉樣途徑代謝。提高細胞內BACE2的水平可有效降低胞內外Aβ的表達。由於神經細胞內BACE2的表達量很低，且外源性BACE2難以穿透細胞膜進入細胞發揮其生物活性。本研究擬採用基因工程技術合成BACE2活性片段與TAT穿膜結構域的融合蛋白，通過體內和體外實驗分別評價細胞內和AD動物模型腦內導入該融合蛋白對APP剪下的影響，檢測通過穿膜肽導入外源性的BACE2活性片段是否可降低細胞及AD動物模型腦組織內Aβ的表達，觀察該融合蛋白對AD模型動物行為學的影響並對其安全性進行評價。本研究有助於進一步認識AD的分子機制，為針對AD特定基因的靶向治療提供理論依據。
結題摘要
本研究首先構建了具有全腦廣泛表達的人BACE2全基因AAV-PHP.eb血清型病毒基因表達載體病毒AAV-PHP.eb-BACE2-3FLAG及對照病毒AAV-PHP.eb-3FLAG。 採用側腦室立體定向注射法感染AD轉基因動物模型APPswe/PS1delE9小鼠。研究發現攜帶BACE2基因的AAV-PHP.eb- BACE2-3×FLAG 病毒感染的APP/PS1小鼠腦內較未攜帶BACE2基因的AAV-PHP.eb-3×FLAG 病毒小鼠及vehicle空白對照小鼠腦內人源BACE2蛋白表達顯著增高。同時APP表達顯著降低，Aβ1-40，Aβ1-42載量顯著下降，澱粉樣斑塊的數量和所占面積顯著下降。體內實驗說明引入外源BACE2過表達在阻斷APP的Amyloid pathway起積極作用，BACE2的這個特點可為AD的基因治療提供理論依據和治療突破口。但是，我們同時也觀查到AAV-PHP.eb-BACE2-3×FLAG 病毒感染的APPswe/PS1delE9小鼠腦內較未攜帶BACE2基因的AAV-PHP.eb-3×FLAG 病毒小鼠及vehicle對照小鼠出現嚴重的行為學改變,BACE2 過表達不能起到腦保護作用。我們的研究說明採用以BACE2作為治療途徑時要慎重，BACE2作為基因治療的安全性有待進一步評估。
