《B型肝炎表面抗體體外親合力成熟及其規律研究》是依託吉林大學，由宿曉雲擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：B型肝炎表面抗體體外親合力成熟及其規律研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：宿曉雲
- 依託單位：吉林大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
抗體親合力成熟是抗體工程的研究熱點。目前常用的兩種方法噬菌體展示技術及蛋白模建技術分別存在著操作繁瑣及模建準確性等問題。本研究擬以B型肝炎表面抗體為對象，將計算機模擬分析技術與抗體的生物篩選、鑑定工作結合起來，以畢赤－巴斯德酵母表達載體為基礎進行基因重組，構建可表達各類天然及突變抗體的支架載體；通過計算機立體結構模擬對不同胺基酸組成的抗體進行結構分析，套用所構建體系進行進一步篩選和表達，研究其結構組成與抗體活性之間的關係，對功能性抗體基因進行鑑定，對高親合力抗體突變規律進行探索。
結題摘要
抗體及其衍生物在臨床的廣泛套用，使得抗體工程日益成為人們研究的熱點。抗體工程研究常用方法包括抗體文庫篩選和蛋白同源模建技術，其中抗體文庫篩選更為常用，技術方法也從噬菌體抗體文庫到核糖體展示、無細胞表達系統等多種篩選體系。本研究中我們選擇了兼具原核系統良好操作性和真核系統強大後加工性的畢赤－巴斯德酵母表達體系進行構建和改良，成功建立了輕鏈、重鏈及完整抗體篩選、表達平台，並套用該平台篩選獲得了抗B肝表面抗體序列。套用計算機立體模擬對獲得序列進行結構分析，在已知抗體來源及所針對抗原基礎上，通過抗原-抗體對接計算確定了B肝表面抗體親和力成熟的關鍵胺基酸（輕鏈Arg30、Ala50和重鏈Arg98）。對突變熱點進行飽和突變，構建小容量的突變庫，經生物學篩選獲得了親和力最佳化的完全人源抗體。本研究以B型肝炎表面抗體為對象，將計算機模擬分析技術與抗體的生物篩選、鑑定工作結合起來，通過生物學技術篩選完全人源抗B肝表面抗體，再藉助蛋白分子模建技術分析抗體突變熱點，實現抗體親和力成熟。充分利用了生物學的功能性篩選優勢和結構計算的排除能力，同時又避免了生物學篩選大量繁瑣，結構計算不準確的缺陷，為高親和性低抗原性單克隆抗體的開發提供了新的思路。
