《ASIC1a對a-synuclein自噬降解調控及其在帕金森病發病中的作用研究》是依託蘇州大學，由王芬擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：ASIC1a對a-synuclein自噬降解調控及其在帕金森病發病中的作用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：王芬
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
組織酸化會引起酸敏感性離子通道（ASICs）的異常激活。最近研究報導，PD模型小鼠腦內也存在組織酸化，且ASIC1a抑制劑能減少多巴胺能神經元缺失，提示ASIC1a可能參與PD發病。但是，ASIC1a是否影響a-synuclein的病理性蓄積進而影響多巴胺能神經元存活，國內外鮮有報導。我們前期研究發現，抑制ASICs活化能上調LC3-II、降低a-synuclein的表達同時促進細胞存活，提示ASICs可能通過調節自噬活性抑制a-synuclein的病理性蓄積，從而保護神經元，但這仍缺乏足夠的實驗學依據。本課題將綜合藥理學及分子生物學等多項技術、分別在細胞和整體水平抑制ASIC1a功能或敲減其表達，研究它對a-synuclein降解的影響及機制，並進一步揭示其在PD發病中的作用。本課題成果將為闡明PD發病新機制和尋找治療新靶標提供理論和實驗依據。
結題摘要
組織酸化會引起酸敏感性離子通道（ASICs）的異常激活。近年來研究發現PD患者腦記憶體在乳酸含量增高的現象，且酸敏感離子通道抑制劑對PD 小鼠具有一定的保護作用，提示ASICs 的異常激活可能參與PD 發病機制，我們前期研究發現，抑制ASICs 活化能上調LC3-II、降低a-synuclein 的表達同時促進細胞存活，提示ASICs 可能通過調節自噬活性抑制a-synuclein的病理性蓄積，從而保護神經元。本課題運用免疫螢光，western blot，膜片鉗等方法從細胞和整體水平研究發現：1，MES32.5細胞以及中腦多巴胺神經元上有功能性的ASIC1通道表達；2， ASIC1a的特異性抑制劑PCTX1和非特異性抑制劑阿米洛利（Amiloride，Ami），可下調由6-OHDA誘導的PC12細胞中LC3-II 和p62 蛋白水平，從而使a-synuclein降解。3，通過鈣成像技術觀察MES23.5細胞上ASIC1a通道在酸化條件下對鈣離子的通透性。當胞外pH值迅速降至 6.0 後可明顯增加胞內鈣離子濃度（[Ca2+]i），達到峰值後回落，該反應可被ASICs通道非特異性抑制劑阿米洛利和特異性抑制劑PCTX1抑制。提示ASIC1a參與了胞外酸化引起的MES23.5細胞胞內Ca2+濃度升高；4， 6-OHDA誘導的PD大鼠模型中，ASIC1a的抑制劑PCTX1和阿米洛利對多巴胺能神經元具有神經保護作用，通過調控自噬途徑對a-synuclein的異常聚集起到降解作用；5，在ASIC1 KO小鼠模型中，MPTP誘導的中腦黑質多巴胺神經元的丟失數量較WT小鼠少，提示，敲除ASIC1對多巴胺能神經元具有保護作用；同時P62及a-synuclein蛋白表達下調，提示敲除ASIC1促進a-synuclein降解。以上結果為全面評估ASIC1在PD發病中的作用提供了理論基礎。
