ANXA7對癲癇發作神經元興奮性的影響及其可能機制

《ANXA7對癲癇發作神經元興奮性的影響及其可能機制》是依託山東大學，由周盛年擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：ANXA7對癲癇發作神經元興奮性的影響及其可能機制
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：周盛年
• 依託單位：山東大學

中文摘要

前期的研究顯示，ANXA7在難治性癲癇患者顳葉腦組織中和氯化鋰-匹羅卡品誘導的慢性癲癇大鼠腦組織中均大量表達，且其主要存在神經元的胞漿內。ANXA7是膜聯蛋白家族中的一員，是依賴Ca2+的磷脂結合蛋白，主要功能是調節細胞內鈣穩態和胞吐等。大量研究顯示癲癇發作可導致離體海馬神經元內[Ca2+]i的動態變化、鈣超載現象的發生。本課題預研究ANXA7對癲癇發作神經元興奮性的影響及其可能機制。通過建立癲癇動物模型和細胞模型，分別對相關蛋白通過免疫共沉澱、免疫組化、western-blot等方法進行研究，並套用雷射共聚焦顯微鏡觀察各組離體海馬神經元內[Ca2+]i的變化，套用膜片鉗技術觀察各組離體海馬神經元的膜電位變化。通過本課題研究證明，ANXA7對癲癇發作神經元興奮性的影響可能是通過PLC/IP3R、sorcin/ryanodine機制促進鈣超載現象的發生，導致神經元損傷和可塑性改變。

結題摘要

癲癇是神經系統常見的慢性疾病，它是由各種不同的原因導致的腦功能障礙， 主要表現為正常腦功能的經常發生不可預測的中斷。作為威脅生命的腦部疾病，癲癇影響了世界約 5000 萬的人口，其中中國癲癇患者約為 900 萬人口，給其家庭造成了嚴重的經濟負擔，成為亟待解決的社會衛生問題 。膜聯蛋白A7（ANXA7）是膜聯蛋白家族中的一員，與鈣結合後可進一步與酸性磷脂結合，故又被稱為鈣依賴性磷脂結合蛋白。在前期的基礎工作中，我們發現膜ANXA7在難治性癲癇患者顳葉腦組織中和小鼠癲癇模型腦組織中均大量表達，主要存在神經元的胞漿中。故我們後續探討了ANXA7蛋白是否參與了癲癇的發生髮展，以及影響了哪些下游分子從而造成了神經元興奮性的改變。首先，我們分別構建了ANXA7蛋白過表達病毒及其抑制病毒，分別在氯化鋰-匹魯卡品和海仁酸兩種癲癇模型中驗證了每組小鼠癲癇發作的潛伏期、發作次數和發作級別的差異均有統計學意義。後用膜片鉗技術分別對每組老鼠的海馬腦片行AP、mEPSP、mIPSP等電生理檢查，發現ANXA7抑制組和過表達組與對照組的差異均有統計學意義。進一步，syncam1是ANXA7的下游蛋白，其可以影響4.1B蛋白直接影響突觸後膜NMDA受體的數量，從而影響神經元的興奮性，我們通過western-blot，RT-PCR等實驗技術驗證了在癲癇患者及癲癇模型小鼠中syncam1和4.1B均為高表達。通過構建syncam1抑制及過表達病毒分組觀察癲癇小鼠行為學及電生理，發現syncam1蛋白表達量的高低可影響癲癇的發生髮展，從而支持了ANXA7-syncam1-4.1B的分子通路。綜上的實驗結果證實了ANXA7蛋白參與的癲癇的發生髮展，讓我們對癲癇疾病中神經元異常興奮的機制有了更深入的探索。