一種有效的農桿菌介導的瞬時表達方法，用於擬南芥幼苗的多功能基因功能分析。
基本介紹
- 中文名：農桿菌介導的強效幼苗轉化方法
- 外文名：Agrobacterium-mediated enhanced seedling transformation
通過農桿菌介導的DNA轉移的瞬時基因表達提供了一種簡單快速的方法來分析轉基因功能。雖然擬南芥是研究最多的具有強大遺傳和基因組資源的模式植物，但實現擬南芥基因功能分析的高效和一致的瞬時表達仍然具有挑戰性。
劉坤祥課題組開發了一種高效且穩健的農桿菌介導的瞬時表達系統，命名為AGROBEST（Agrobacterium-mediated enhanced seedling transformation），其實現了對完整擬南芥幼苗中多種基因功能的通用分析。使用β-葡萄糖醛酸酶（GUS）作為農桿菌介導的轉化測定的報告基因，使用具有vir基因預誘導的特定的土壤桿菌菌株導致幼年擬南芥幼苗的子葉中的同源GUS染色。在農桿菌感染期間用酸性pH 5.5緩衝的植物培養基中用AB鹽進行最佳化大大提高了瞬時表達水平，這顯著高於兩種現有方法。重要的是，最佳化的方法賦予100%感染的幼苗在枝條中具有高度增加的瞬時表達以及在免疫受體突變體efr-1和野生型Col-0幼苗中~70%感染幼苗的根中的轉化事件。最後，證明了該方法在生理環境中檢測轉錄因子作用和晝夜節律報告基因調控以及蛋白質亞細胞定位和蛋白質 - 蛋白質相互作用的通用適用性。
AGROBEST是一種簡單，快速，可靠，穩定的瞬時表達系統，能夠在擬南芥幼苗中實現高瞬時表達和轉化效率。 除了之前在螢光蛋白定位和蛋白質 - 蛋白質相互作用研究中的套用之外，概念驗證實驗的證明將瞬時表達技術提升到擬南芥幼苗中的功能研究水平。 此外，AGROBEST提供了一種解剖農桿菌介導的DNA轉移相關分子機制的新方法。
