ABCG2甲基化分析及對瑞舒伐他汀代謝影響的機制性研究

《ABCG2甲基化分析及對瑞舒伐他汀代謝影響的機制性研究》是依託中南大學，由王果擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：ABCG2甲基化分析及對瑞舒伐他汀代謝影響的機制性研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：王果
• 依託單位：中南大學

項目摘要

DNA 甲基化是目前已知唯一天然DNA共價修飾方式，與基因表達調控密切相關。ABCG2基因編碼乳腺癌抗性蛋白（BCRP），生物信息學和體外研究證實其啟動子CpG島甲基化程度與其表達負相關。通過製備志願者糞便gDNA，利用甲基化敏感內切酶-實時定量PCR，重亞硫酸鹽處理-測序和雙螢光素酶活性檢測等分析中國健康人群腸道上皮細胞ABCG2甲基化分布特徵；闡明不同甲基化區段和甲基化位點對其表達的影響；將BCRP底物藥瑞舒伐他汀（rosuvastatin）作為探針藥，研究ABCG2甲基化對其藥代動力學個體差異的影響。本項目將為遺傳藥理學研究的深入與拓展提供一種新的思路，為BCRP底物藥在臨床套用上個體化用藥的實現提供新的研究基礎；並以ABCG2為突破點，研究表觀遺傳學在藥物反應個體差異中的作用；建立成熟研究體系，系統研究表觀遺傳學因素對現知可遺傳性變異無法完全解釋其個體差異的基因表達及功能的影響。

結題摘要

在基金資助下，利用焦磷酸測序儀器平台，本項目新建了焦磷酸測序檢測ABCG2基因甲基化的技術方法。通過構建ABCG2基因甲基化和非甲基化質粒，通過配比獲得一系列不同比例質控模板，再行PCR-焦磷酸測序對這一系列已知甲基化程度質控品進行甲基化程度檢測並繪製回歸曲線，結果證明該方法建立成功。利用該方法分析18株腫瘤細胞株ABCG2甲基化程度，部分細胞株檢測結果與資料庫或文獻報導一致，證明本項目新建方法準確可靠。其餘部分細胞株的ABCG2甲基化程度尚未見報導。本項目還利用該方法對收集到的24例健康中國男性糞便gDNA標本進行ABCG2甲基化檢測，初步了解了中國健康男性腸道脫落上皮細胞中ABCG2甲基化分布特徵，結果顯示該基因1號外顯子的甲基化程度在中國健康男性中存在顯著差異，可能是影響該基因表達並進而導致個體藥物反應差異的重要原因。為進一步了解ABCG2基因CpG島不同區段的甲基化對該基因表達的影響作用，本項目構建了一系列包含不同甲基化與非甲基化區段的螢光素酶報告基因載體，通過瞬轉細胞並檢測螢光素酶活性，發現基礎啟動子和1號外顯子的甲基化對於該基因表達具有顯著影響。為了解和排除ABCG2具有功能意義的SNP對於後續研究的影響，本項目新建焦磷酸測序分析SLCO1B1基因521、388位，ABCG2基因34、421位多態基因型的方法，經多樣本重複驗證及毛細管電泳測序驗證，確定所建新方法準確可靠，並對800例中國健康男性進行了分型分析，了解了上述SNP位點的分布特徵。在分型分析結果的基礎上，本項目對中國人群中常見的ABCG2 34位多態的功能意義進行了臨床實驗研究。同時，因為34和421位多態發生頻率很高，且不在同一個block群中，因此該臨床實驗還探討了不同34/421單倍型對於ABCG2底物藥藥代動力學的影響作用。本臨床實驗發現34位突變純合子以及34位/421位雙突變雜合子能夠顯著降低BCRP對底物藥的轉運，提高藥物血藥濃度。這一研究結果是首次發現，尚無文獻報導。在本項目基金資助下，課題組成員還參與了其它一些研究工作。已發表SCI論文4篇，CSCD論文4篇，待發表SCI論文2篇，CSCD論文2篇。