《A型流感病毒激活肥大細胞的分子機制研究》是依託中國農業大學，由胡艷欣擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：A型流感病毒激活肥大細胞的分子機制研究
- 依託單位：中國農業大學
- 項目負責人：胡艷欣
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
過度炎症反應致肺損傷是A型流感病毒（IAV）感染造成機體死亡的主要原因之一，但病毒感染致過度炎症反應的機制尚不明確。申請人最新研究表發現（2012，J Virol），肥大細胞(MC)的活化及其炎性介質的釋放參與了IAV感染致小鼠肺損傷的過程，且MC活化被抑制後，肺損傷顯著減輕，但IAV如何激活MC尚不清楚。我們推測，IAV可能首先通過唾液酸受體與MC結合進入細胞內，再通過TLR-3/RIG-1分子通路將MC激活。本研究通過解析MC表面唾液酸受體表達，揭示IAV進入MC的分子通路；接著進一步研究IAV感染MC過程中TLR3/RIG-1的表達及其通路的激活，揭示IAV激活MC的分子機制；再通過體外TALEN靶向基因敲除細胞和體內基因敲除小鼠驗證TLR3/RIG-1通路在IAV激活MC過程中的作用。本研究將為明確流感病毒感染導致過度炎症反應的機制提供有價值的資料，同時可為流感的治療提供新思路。
結題摘要
A型流感病毒感染可導致人類和動物的急性上呼吸道感染，病毒的快速傳播以及較高的發病率和致死率給公共健康造成了巨大的威脅。研究認為，病毒感染導致的過度炎症反應（“細胞因子風暴”）是流感病毒高致病力和高致死率的主要原因之一，但是相關機理仍有待進一步研究。本篇研究論文對肥大細胞和調節性T細胞在A型流感病毒感染與免疫中的分子機理進行初步探索。本研究證實P815傳代肥大細胞系、小鼠腹腔和肺臟、大鼠腹腔和肺臟、人肺臟原代肥大細胞表面均同時表達SAα2,3Gal和SAα2,6Gal兩種唾液酸受體；在P815細胞體外實驗模型中，H1N1（A/WSN/33）、H5N1（A/Chicken/Henan/1/04）和H7N2（A/Chicken/Hebei/2/02）三種亞型A型流感病毒均能夠在P815細胞內進行複製，其中，H1N1病毒複製效率最高，H5N1病毒僅次於H1N1病毒，H7N2病毒的複製效率顯著低於H1N1和H5N1病毒；在小鼠和雪貂體內實驗模型中，H5N1病毒能夠感染小鼠鼻黏膜、肺組織和雪貂肺組織中的肥大細胞。三種亞型流感病毒感染P815肥大細胞均可激活TLR3和RIG-I信號通路，且細胞活化後大量釋放促炎細胞因子和趨化因子，而不分泌抗病毒因子；三種亞型病毒感染P815細胞誘發的TLR3通路活化和凋亡反應，有利於病毒在細胞內的有效複製以及炎性因子的釋放。採用磷脂醯絲氨酸染色法及後續的流式細胞儀分析，比較了三株不同亞型流感病毒誘導肥大細胞的凋亡比率，結果顯示三株病毒誘導肥大細胞凋亡的能力為H5N1＞H1N1＞H7N2。本研究採用了Western Blot，Caspase抑制實驗和磷脂醯絲氨酸染色法及後續的流式細胞儀分析，對A型流感病毒誘導肥大細胞凋亡的信號通路進行了研究。結果提示病毒主要通過線粒體介導的內源性通路誘導細胞凋亡的發生，而死亡受體介導的通路的活化在病毒誘導的細胞凋亡中比較微弱。本研究首次從分子水平上初步揭示了A型流感病毒入侵和激活肥大細胞的機理。
