《齶裂形成中miR-106a-5p靶向TGF-βR2和SATB2基因調控自噬的機制研究》是依託汕頭大學，由唐世傑擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：齶裂形成中miR-106a-5p靶向TGF-βR2和SATB2基因調控自噬的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：唐世傑
- 依託單位：汕頭大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
唇齶裂發生是基因和環境因素共同作用的結果，其發病機理尚未完全闡明。近年報導細胞自噬障礙嚴重影響胚胎細胞的正常分化和發育。本課題組前期發現，維甲酸誘導胎鼠齶裂的發生與齶突中嵴上皮/齶胚間充質(MEE/EPM)細胞自噬紊亂密切相關。在前期基礎上，本課題提出miR-106a-5p通過TGF-βR2/SMAD信號通路抑制MEE細胞發生自噬性死亡、同時作用於SATB2通過PTEN/AKT/mTOR信號通路促進EPM細胞發生自噬性死亡參與齶裂發生的假說。為此，本項目將以齶裂發生中MEE/EPM細胞自噬失調作為切入點，觀察miR-106a-5p和TGF-βR2、SATB2變化與齶裂發生的關係，以揭示miR-106a-5p/TGF-βR2/SMAD和SATB2/PTEN/AKT/mTOR/自噬通路在齶裂發病中的作用，為齶裂發生的新機制提供新的依據，為產前篩查齶裂提供新的標誌物，為其診療提供新的靶點。
結題摘要
唇齶裂發生是基因和環境因素共同作用的結果，其發病機理尚未被完全闡明。近年報導細胞自噬障礙嚴重影響胚胎細胞的正常分化和發育。本項目提出“miR-106a-5p通過TGF-βR2/SMAD信號通路抑制MEE細胞發生自噬性死亡、同時作用於SATB2通過PTEN/AKT/mTOR信號通路促進EPM細胞發生自噬性死亡參與齶裂發生”的假說。課題組通過六個部分來證明該假說。（1）通過RT-qPCR、Western blot、雙螢光素酶實驗、慢病毒轉染技術等，證實miRNA-106a-5p通過調節靶基因Tgfbr2，以及SMAD信號通路影響齶突間充質細胞的凋亡從而導致齶裂的發生。（2）通過對482例血樣進行多態性檢測及meta分析，未發現SATB2基因多態性與單純性齶裂的發生有明顯關聯。（3）通過流式細胞檢測以及成骨，成軟骨，成脂肪三向誘導分化檢測，證實了齶突間質細胞為外胚層間充質幹細胞；且齶突間質細胞的強成骨分化能力。（4）通過免疫螢光、WB技術以及電鏡檢測，證實細胞自噬是間充質幹細胞乾性的重要表征：分化能力越強，自噬現象越明顯；分化能力降低後，自噬現象受抑制。（5）通過免疫螢光以及電鏡技術，證明RA通過影響齶突間質幹細胞PTEN/AKT/m-TOR信號通路減弱自噬水平進而導致成骨能力減低，最終導致齶裂發生。（6）套用7T及9.4T 1H-NMR 檢測母鼠羊水、血清中水溶性和脂溶性代謝物，在羊水代謝物中建立了特異性和敏感性較高的預測性PCA模型。本項目以齶裂發生中齶突間質細胞自噬失調作為切入點，證實了miR-106a-5p通過TGF-βR2/SMAD信號通路調控齶突間充質細胞凋亡，同時，RA通過影響齶突間質幹細胞PTEN/AKT/m-TOR信號通路減弱自噬水平進而導致成骨能力減低，最終導致齶裂發生。為齶裂發生的新機制提供新的依據，為產前篩查齶裂提供新的代謝組學檢測的新方向，為其診療提供新的靶點。
