點樣

將待分離、鑑定的樣品溶液的液滴加到薄層板上的過程稱之為點樣。點樣是造成定量誤差的主要來源。樣品溶液的製備過程中，不同的點樣設備、點樣體積，以及點樣方式等均是造成誤差的因素。上述條件的選擇決定於分析目的、樣品溶液的濃度及被檢測農藥的靈敏度。

基本介紹

• 中文名：點樣
• 外文名：sampling point
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1. 點樣設備

點樣設備分為手持型和機械型。目前最常用的點樣設備是定量毛細管或微量注射器，點樣時，直接手持點樣器接觸薄層板面，利用毛細作用或手移滴加樣品溶液到薄層板表面，完成點樣工作。近年來，國內外相繼開發了機械點樣的設備，比較先進的全自動點樣設備結合了現代電子及機械技術，實現吸樣、點樣、清洗、點樣方式的安排、點樣速度的控制等一體化操作，使定量分析結果準確。

2. 點樣方式

（一）點狀點樣

如果僅僅為了定性，用內徑約0.5mm管口平整的毛細管或微量注射器將樣品溶液點在距薄層底邊約2cm處，點樣直徑不超過5mm，點間距約為1-1.5cm即可。為進行定量，借毛細作用吸樣的定容管有兩種，一是容積為0.5、1、2、3、4及5μL的定量毛細管(Microcaps)，另一種是100及200nl的鉑銥合金定量毛細管(Nanopipette)；注射器式的可變體積的點樣器有50-230nl的毫微點樣器(Nano-Applicator)及0.5-2.3μl的微量點樣器(Micro-Applicator)，用於需要調節體積及沒有毛細作用的鍵合相薄層的點樣。

毛細管式的微量點樣器裝在手動的Nanomat型點樣裝置的磁性點樣頭上，點樣頭裝在彈簧上。按下此點樣頭，毛細管借恆定的壓力接觸薄層表面。點間距離由帶準確的#44 間隔的E字形缺刻裝置控制，CAMAG Nanomat Ⅲ型手動點樣器，適用於普通或高效薄層板，點樣體積精確，樣品原點小，原點間隔定位準確；注射器式的毫微點樣器及微量點樣器由測微尺控制，也可與Nanomat型點樣裝置配合，以使點樣位置精確。

電動的Nanomat Ⅲ型點樣裝置完全適用於上述各種點樣器的配套使用，並且還可以自動控制點樣次數，點樣器在薄居上的停留時間，以及點樣器接觸薄層的速度。還可避免手持毛細管點樣時的用力不勻，由於靠機械控制接觸板面，壓力恆定。此外，還有可以用於環形展開及向心展開的薄層點樣裝置。

（二）帶狀點樣

當樣品溶液體積大、濃度稀時，採用CAMAG Linoamt Ⅳ型自動點樣設備進行帶狀點樣。定量分析的點樣範圍為1-99μl，製備型分離點樣範圍為5-490μL，作定量標準曲線時，可由同一標準溶液，自動點上不同體積的標準液，故快速簡便，利用內裝的微處理器編序操作，簡單易行。使用時樣品溶液吸在微量注射器中，點樣器不接觸薄層，而是用氮氣將注射器針尖的溶液吹落在薄層上，薄層板在針頭下定速移動點成0-199mm的窄帶。帶狀點樣展開後的斑點不僅解析度明顯高於點狀點樣，而且精密準確，為定量分析提供最佳條件。

（三）自動點樣

Automatic TLC Sampler Ⅲ型（ATS Ⅲ）全自動點樣裝置結合了現代最先進的電子及機械技術，能進行點狀或帶狀點樣，採用先進計算機編程控制，靈活多用，點樣量為10nl-50μl，可隨意設定點樣規範，可套用於單向、雙向、環形或向心色譜展開，高度自動化的點樣使定量分析結果準確。點樣參數可與Scanner Ⅱ掃瞄器的CATS掃描分析軟體連用，令定量分析工作達到高度自動化。

（四）接觸點樣

當樣品溶液粘度較大或點樣體積要超過100μl時，用毛細管點樣就有困難，Fenimore設計的接觸點樣法適用於這類樣品的點樣，美國製造的Clarke Contact Spotter就是這種接觸點樣器，見圖7-3-2。在帶有抽氣孔的凹形塊的上方覆蓋一片塗有疏水性物質的聚氟化物薄膜（a），當減壓抽氣時薄膜凹陷（b），此時將樣品溶液點在凹槽處（c），然後用氮氣吹去大部分溶劑（d），再將濃縮後的樣品液滴與高效薄層板的吸附劑層接觸（e），此時樣品就定量地轉移到薄層上。

3. 注意事項

（一）不同溶劑對樣品的洗脫能力不同，因此在點樣的同時，樣品在原點開始呈環形展開，如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點將變成空心環，Kaiser稱這種現象為“點樣環形色譜效應”。這種效應對隨後的線形展開造成不良影響，因此配製樣品溶液時應選用對組分溶解度相對較小的溶劑；溶劑的粘度不宜過高，以便於點樣，溶劑的沸點要適中，沸點過低由於揮發會改變樣品溶液濃度導致較大誤差，沸點過高，樣品溶液的溶劑會在原點殘留，導致改變展開劑的選擇性，特別是樣品溶液的溶劑與展開劑的極性相差較大時更為明顯，最常用的溶劑為甲醇及乙醇，有時也用丙酮。點樣後必須將溶劑全部除去後再進行展開，但要避免高溫加熱，以免改變待測成分的性質。點樣方式、點樣量及點樣設備的選擇決定於分析的目的、樣品溶液的濃度及被測物質的檢出靈敏度。

（二）點樣體積經典薄層一般為1-5μl，高效薄層為100-500nl，樣品溶液濃度一般在0.01%-1.00%範圍內，點樣過多會造成原點“超載”，展開劑產生“繞行”現象使斑點拖尾或重疊，使掃描峰形不對稱或不能基線分離，並由於超載得到非線性的校正曲線，嚴重影響定量結果，降低準確度。經典薄層的原點直徑最大不得超過5mm，一般3mm較為合適，高效薄層原點直徑約為1-2mm，儘可能避免多次點樣，原點直徑過大會降低解析度及分離度。經典薄層起始線距底邊約1.5cm，高效薄層為1cm，展距前者為10-15cm，後者為5-7cm，對於難分離的化合物用多元展開劑展開時，注意原點與展開劑的距離每次要保持一致，否則由於色譜分離最初行為的差異而導致分離失敗。點與點的間距經典薄層為1-2cm，高效薄層為0.5cm，用具自動換行功能的薄層掃瞄器時，斑點之間的距離必須十分精確，才能正確地掃描每行的色斑，得到好的測定結果。

（三）在點樣前，應將薄層板在日光及紫外光下檢查板面有無損壞或污染，選擇合格的薄層板後決定用點狀點樣還是用帶狀點樣。為此，瑞士CAMAG公司生產了系列點樣設備以供選用，這些設備只適用於硬板。下面是常用的點樣方式及設備。