《黃芪黃連組合防治糖尿病腎病的自噬途徑研究》是依託上海交通大學，由徐俊擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：黃芪黃連組合防治糖尿病腎病的自噬途徑研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：徐俊
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
自噬途徑在糖尿病及其併發症發生髮展過程中起著重要的作用，但其多靶點、雙向作用機制至今尚未被完全闡明。芪連消渴方臨床驗證具有確切的改善糖脂代謝、減少蛋白尿的作用，其君藥黃連的有效成份小檗鹼在我們前期研究中發現可以抑制脂肪細胞自噬，改善糖脂代謝，方中另一味君藥黃芪為腎內科防治蛋白尿的常用藥物。研究表明，在腎小球足細胞中自噬狀態的激活可以起到減少蛋白尿、保護足細胞的作用。我們推測：黃芪甲苷配伍小檗鹼，一方面通過抑制脂肪細胞的自噬，另一方面促進腎小球足細胞的自噬，從而起到改善糖脂代謝、減少蛋白尿的作用。本研究探討了兩味藥物配伍情況下自噬通路變化情況及作用機制，及在糖尿病腎病動物模型上，整體水平驗證相關生化指標及自噬通路作用情況。
結題摘要
背景：Beclin1是一種重要的自噬蛋白，近年來備受關注。目前認為Beclin1存在磷酸化、泛素化、乙醯化等修飾，直接影響Beclin1介導的自噬過程。Beclin1乙醯化在糖尿病及其併發症中的作用尚不清楚。主要研究內容：探討自噬和Beclin1乙醯化在高糖所致早期腎損傷中的作用，以及Beclin1乙醯化突變對高糖狀態下足細胞的影響，為後期基於相關分子靶點及通路進行的中藥單體的篩選，提供相關實驗依據。重要結果、關鍵數據：STZ模型組大鼠在第4周時，甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、血清肌酐（Scr）、尿肌酐（Ucr）、微量白蛋白尿、UACR、血糖明顯升高，而體重減低，LC3II/I、Beclin1表達上調。IP試驗發現正常大鼠Beclin1乙醯化有基本表達，STZ組在第4周時Beclin1乙醯化水平升高。體外分別用低葡萄糖（15mmol/L D-葡萄糖）、高糖（30mmol/L D-葡萄糖）處理足細胞24小時，觀察到與對照組相比，LC3II/I、Beclin1升高，podocin、nephrin、Integrinα3β1下降。此外，IP還表明，隨著糖含量的增加，Beclin1的乙醯化作用增強。然後，將野生型或K414R突變載體分別用慢病毒轉染足細胞，western blot結果顯示，隨著糖濃度的增加，LC3II/I、Beclin1升高，而podocin、nephrin和Integrinα3β1下降，突變組則有一定程度的逆轉。免疫組化分析表明，隨著糖濃度的增加，細胞骨架蛋白的表達明顯減弱，而慢病毒轉染突變質粒後，細胞骨架蛋白的表達有一定程度的恢復。科學意義：在高糖條件下，糖尿病腎病早期足細胞受損，自噬和Beclin1乙醯化被激活；Beclin1乙醯化突變（K414R）可逆轉高糖對足細胞的損傷。這些發現揭示了Beclin1乙醯化及其突變位點是糖尿病腎病早期調節自噬和足細胞功能的關鍵分子和其作為藥物靶點的潛力。
