《鹽酸小檗鹼調節MTP啟動子甲基化與肝臟脂肪含量的關係》是依託復旦大學，由劉蒙擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：鹽酸小檗鹼調節MTP啟動子甲基化與肝臟脂肪含量的關係
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉蒙
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
我課題組初步研究發現鹽酸小檗鹼（BBR）降低高脂飲食飼養的大鼠肝細胞內甘油三酯（TG）含量，上調肝臟微粒體甘油三酯轉運蛋白（MTP）表達。為證明BBR通過降低MTP啟動子區域甲基化程度，使肝臟MTP表達上調而減少肝臟脂肪含量，擬用高脂飲食誘導的大鼠脂肪肝模型，BBR干預16周，觀察BBR是否降低MTP 啟動子區域甲基化程度上調MTP mRNA表達；為了進一步探討BBR降低MTP啟動子甲基化程度的機制，在游離脂肪酸誘導的肝細胞脂肪變性模型上，以siRNA干擾Dnmt-1的表達和5-氮雜-2'-脫氧胞苷抑制其活性，觀察BBR上調MTP表達是否受到影響，證明BBR可能通過增加Dnmt-1表達或/和活性來降低MTP啟動子區域甲基化程度，引起MTP mRNA的表達上調從而減少肝臟脂肪沉積，為BBR治療非酒精性脂肪肝病從而防治糖脂代謝紊亂提供理論依據。
結題摘要
研究背景：多項前瞻性研究發現NAFLD 對代謝綜合徵、2 型糖尿病及心血管疾病（CVD）具有一定預測意義。近年來發現鹽酸小檗鹼（berberine，BBR，又名黃連素）具有調脂、改善胰島素抵抗的作用。我課題組同期採用高脂飲食誘導8 周的SD 大鼠NAFLD 模型，高脂飲食可導致微粒體甘油三酯轉運蛋白（MTP）mRNA 水平明顯降低，而給予BBR 後能上調該基因的表達。國外一些研究發現MTP 基因的表達下調在動物水平和人體水平均能促進肝細胞脂肪沉積。引起基因表達水平改變的原因主要包括基因突變、DNA 表觀遺傳學修飾。MTP 基因單個位點的突變無法解釋人群中NAFLD 的高患病率，因此需要探索其他可能引起MTP mRNA 水平下降的原因。 研究方向：高脂飲食導致肝臟脂肪沉積，鹽酸小檗鹼能夠減輕肝臟脂肪沉積，且能夠上調肝臟MTP基因的表達。我們進一步研究：1.高脂飲食可能增加MTP 啟動子區域CpG 位點甲基化程度，使MTP mRNA水平降低，導致肝臟脂肪沉積；而BBR 可能通過降低MTP 啟動子區域甲基化程度來上調MTP 表達，減少肝臟脂肪沉積。２：高脂飲食及BBR是否改變了DNA 甲基轉移酶-1（Dnmt-1）的活性？ 主要內容：從動物和細胞水平探索 MTTP DNA甲基化在高脂飲食誘導的脂肪沉積及BBR減輕肝臟脂肪含量中的機制。重要結果： BBR干預16 周能明顯減輕NAFLD 大鼠體重、內臟脂肪總量及肝臟的濕重，改善脂代謝紊亂。對MTP基因表達異常的機制進行研究，結果表明高脂飲食飼養大鼠肝臟MTTP 啟動子區域平均甲基化水平顯著高於正常飲食對照組。並且BBR 顯著減低這些CpG 位點的甲基化程度（最多至30%）。相關性分析結果表明-113 和-20CpG 位點的甲基化程度與MTTP mRNA 水平呈顯著負相關。這些研究結果提示高脂飲食導致肝臟MTTP 基因啟動子區域高度甲基化，影響MTTP 的轉錄，從而引起MTTP mRNA 水平的下降。測定肝臟DNA 甲基轉移酶-1（Dnmt-1）mRNA 和蛋白水平在各組之間無明顯差別。提示高脂飲食及BBR導致肝臟MTP基因DNA甲基化程度改變的機制與Dnmt-1無關，可能存在其他的機制。在細胞水平證明鹽酸小檗鹼及5-Aza-C能上調MTP基因的表達。提示鹽酸小檗鹼通過抑制甲基轉移酶而而調節肝細胞MTP甲基化程度。
