《鴨TRIM25 介導RIG-I信號通路泛素化的調控機制》是依託揚州大學，由徐琪擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：鴨TRIM25 介導RIG-I信號通路泛素化的調控機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：徐琪
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
研究表明，鴨的RIG-I基因（雞基因組缺失）是雞和鴨對流感病毒敏感性差異的重要原因，但鴨RIG-I在體內是如何發揮作用，其機制不清楚。大量研究證實，泛素化修飾廣泛參與了免疫通路調節，本課題組前期研究也發現鴨泛素連線酶TRIM25直接參與RIG-I信號通路的激活。因此推測TRIM25可能介導RIG-I信號通路的靶分子泛素化，活化信號通路，發揮抗病毒效應。基於此，本項目擬採用5'ppp-dsRNA體外模擬病毒感染（RIG-I能優先識別禽流感等病毒的5'ppp RNA序列），確定TRIM25在RIG-I信號通路中的作用位置（靶分子），進一步揭示 TRIM25介導的靶分子泛素化水平的影響，重點探索TRIM25介導的靶分子泛素化作用位點及其對IFN-β產生的影響。研究將全面闡明鴨TRIM25 介導的RIG-I信號通路泛素化調控機制，也為進一步探明雞和鴨對禽流感敏感性差異提供一定的科學依據。
結題摘要
禽流感特別是高致病性禽流感嚴重阻礙了養禽業的發展。RIG-I基因在抵抗禽流感等病毒中起著十分重要作用。前期研究已發現TRIM25參與RIG-I 介導的信號通路的調節，並鑑定出其差異表達基因在RIG-I信號通路顯著富集。據此我們假設TRIM25介導RIG-I信號途徑促進IFN-β活性，進而影響抗病毒效應。為了驗證這一假說，本項目首先探究TRIM25在RIG-I信號通路中的調控作用；闡明了TRIM25 介導的RIG-I信號通路調控的分子機制。研究結果不僅揭示了鴨TRIM25 介導的RIG-I信號通路調控分子機制，同時也為禽流感疾病的防控提供一定的理論依據。1、鴨TRIM25基因的獲得及組織特異性表達分析得到TRIM25 cDNA全序列，包括16bp的5'UTR、2052bp的ORF和279bp的3’ UTR。TRIM25在腎、肝和脾中高度表達。經5'ppp dsRNA 刺激後TRIM25的表達水平表現為迅速升高后降低的趨勢。2、TRIM25參與RIG-I 介導的信號通路的調節，促進IFN-β的表達過表達TRIM25在LPS和5'ppp dsRNA刺激下激活NF-κB和IRF1轉錄活性，促進IFN-β的產生。此外，TRIM25的 B-Box和SPRY結構域能顯著激活IFN-β的轉錄活性。3、TRIM25參與RIG-I信號通路調控從而促進RIG-I信號通路下游基因的表達檢測過表達TRIM25在5’ppp dsRNA的刺激下不同時間點RIG-I信號通路 mRNA的表達水平。過表達TRIM25經5’ppp dsRNA刺激顯著上調IFN-β、RIG-I和MAVS的表達，同時RIG-I信號通路的下游基因表達水平也呈上升趨勢。4、蛋白質組學和泛素化組學分析 5’ ppp dsRNA激活的抗病毒信號通路中相關分子的回響通過蛋白質組學分析發現差異蛋白在RIG-I樣受體信號通路（apla04622）顯著富集。泛素化修飾組學則5’ ppp dsRNA刺激鴨胚胎成纖維後TRIM25的第201位賴氨酸泛素化位點顯著上調。綜上所述，TRIM25通過激活IRF1和NF-κB轉錄因子，觸發I型干擾素的產生，從而激活RIG-I信號通路，同時通過TRIM25自泛素化調控RIG-I信號通路，促進TRIM25在RIG-I 介導抗病毒信號通路中作用。
