《高爾基相關蛋白GOLPH2/GP73調節CD44V6內吞促進肝癌轉移》是依託復旦大學，由任正剛擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：高爾基相關蛋白GOLPH2/GP73調節CD44V6內吞促進肝癌轉移
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：任正剛
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
肝癌高表達高爾基相關蛋白GOLPH2/GP73是肝癌重要診斷和預後標誌物，但機制不明。前期研究發現惡性潛能高的肝癌細胞高表達GP73，慢病毒介導RNA干擾沉默GP73表達後肝癌細胞增殖、抗失巢凋亡及侵襲能力減弱。構建FLAG-GP73過表達體系，SDS-PAGE分離後銀染質譜分析，CO-IP結果提示GP73和Dynamin2相互作用。初步結果提示GP73可能參與調節CD44V6內吞和細胞內循環。鑒於CD44V6為具有內吞效應的膜蛋白信號分子，與Src激酶的密切聯繫，進一步通過研究GP73、CD44V6、Rab5、Rab11空間定位和相互關係，分析CD44V6在細胞膜上表達量動態變化及下游關鍵分子的活性和細胞生物學特性改變，深入研究GP73調節CD44V6內吞循環及Src激酶等轉移相關的關鍵信號分子活性，及對肝癌轉移的影響，力爭明確GP73促進肝癌轉移的機制和對Src激酶抑制劑的敏感性。
結題摘要
GOLPH2/GP73是高爾基複合體膜相關蛋白，近年來發現肝癌組織表達顯著增高。最初的研究發現其作為肝癌的標誌物，診斷肝癌有較高的敏感性和特異度。但晚近發現，該分子與肝癌的惡性生物學行為（如轉移潛能）以及肝癌的預後有密切關係。然而，GOLPH2在肝癌發生、發展過程的作用卻不明確。本課題在前期的研究基礎上，探索了GOLPH2調節肝癌細胞膜分子CD44分子內吞循環的作用，以及對相關信號途徑的影響以及臨床意義。研究發現，GOLPH2可提高肝癌轉移潛能，而這種作用與CD44有密切關係。通過提取透明質酸刺激後不同時間點膜蛋白CD44豐度，以及免疫螢光、免疫共定位的方法，發現GOLPH2主要促進了CD44分子的內吞後再循環，提高肝癌細胞膜CD44的豐度，其作用機理是抑制了CD44分子內吞後形成的內涵體向晚期內涵體的轉化，從而減少了CD44分子內吞後晚期內涵體-溶酶體的降解。然而，CD44分子在肝癌細胞中的內吞過程不依賴動力蛋白dynamin2的作用，後者可通過其他信號分子如EGFR，調節MAPK而影響肝癌的轉移潛能。在176例構建的肝癌組織晶片上，通過免疫組織化學染色檢測了GOLPH2和CD44的表達，結果顯示，高表達GOLPH2及CD44分子的肝癌患者預後顯著較低表達者差，其中位生存期分別38.70±2.86月vs 51.79±3.5月（p＜0.001）和37.07±2.97月vs 50.70±3.99月（p=0.002）。本課題首次明確了GOLPH2可通過調節CD44分子內吞循環，抑制CD44分子降解，進而促進肝癌的轉移，為干預肝癌轉移提供新的治療靶點，建立臨床前期的理論基礎。
