《高效特異靶向HA基因載體系統構建及其轉染機理研究》是依託中南大學，由黃蘇萍擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：高效特異靶向HA基因載體系統構建及其轉染機理研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：黃蘇萍
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
鼻咽癌是一種發病率很高且與遺傳易感性、EBV感染相關的上皮細胞性惡性腫瘤。LMP1是EBV編碼的目前已被確證的具有瘤基因功能的致瘤蛋白，在鼻咽癌的發病中起著重要作用。 研究已證實靶向LMP1的脫氧核酶能夠增強鼻咽癌細胞對放療的敏感性。因此構建高效特異靶向LMP1 脫氧核酶的基因載體系統是基因治療鼻咽癌的一種新策略。目前限制其臨床套用的關鍵瓶頸是缺乏安全、高效的基因轉染載體。本項目採用水熱摻雜的方法將HA製備成多孔且可螢光標記的納米顆粒，以提高載體的基因攜帶率和螢光特性，並將靶向LMP1脫氧核酶負載在多孔HA納米顆粒內形成複合體後，再在其表面枝接黏附肽，增載入體系統對細胞的親和力，提高載體進入細胞的胞吞作用，從而顯著提高載體的入胞效率。最終構建出高效特異靶向LMP1的基因載體系統，大幅度提高HA基因載體的轉染效率，為基因治療鼻咽癌提供新的思路和實驗依據。
結題摘要
本項目針對目前基因治療鼻咽癌缺乏安全、高效的特異靶向基因載體這一問題，以提高納米羥基磷灰石基因載體的轉染效率為核心，採用水熱合成發製備了介孔螢光納米HA基因載體，並進行了生物學評價。結果表明 （1）研究表明表面活性劑對HA晶粒形貌無顯著影響,但對孔結構的形成具有明顯的作用。無表面活性劑存在時，晶粒比表面積只有33m2/g,，無明顯的孔結構。而有表面活性劑存在時， HA納米棒很多孔徑大小約2-7nm的開孔。氮氣吸附-脫附曲線均為吸附IV型等溫線，並伴有明顯的滯後環，說明介孔結構的存在。當CTAB與HA的摩爾比為1:2時，樣品的比表面積與孔容最大，比表面積為97.1 m2/g，孔容為0.466cc/g。 （2）隨著Tb含量由lm01％增到5m01％，顆粒形貌由短棒狀轉為不規則短棒狀與針狀，且螢光性能有顯著增強。pH值由6．5增大到10．0時，顆粒由長棒狀向短棒狀和等軸狀轉化，並出現針狀和不規則顆粒。隨著pH值的增大，納米Tb：HA顆粒的螢光強度呈增大趨勢。水熱時間由3h延長到24h，納米Tb：HA顆粒主要為短棒狀和針狀，顆粒長徑比有減小趨勢。隨時間延長，顆粒中Tb實際摻入量由2．88m01％提高到2．97m01％，螢光強度也相應增強。隨著Eu摻入量由lm01％增到7．5m01％，顆粒形貌由短棒狀轉為不規則短棒狀與針狀，螢光性能顯著增強。 pH值由6．5增大N10．0，顆粒由棒狀向等軸狀轉化。Eu含量呈減小趨勢，其螢光強度也隨之呈微弱的降低趨勢。水熱時間由3h延長至lJ24h，顆粒主要為短棒狀和等軸狀，顆粒長徑比有減小趨勢。Eu實際摻入量有減小的趨勢，螢光強度呈減弱趨勢。 （3）Arg-mHAP對脫氧核酶的體外包裝效率可高達100%。經過不同抑制劑處理證實了Arg-mHAP/DZ1複合物是通過能量依賴的內吞作用進入細胞。此外，我們利用雷射共聚焦顯微技術，觀察到Arg-mHAP可將靶向LMP1脫氧核酶有效地遞送到鼻咽癌細胞內，並進入細胞核，發揮其生物學作用，下調靶基因LMP1的表達。在鼻咽癌裸鼠移植瘤模型中，Arg-mHAP將脫氧核酶有效地遞遞到腫瘤組織內，下調EBV-LMP1的表達和抑制腫瘤生長。本研究表明Arg-mHAP納米載體可作為核酸類藥物的有效遞送載體，具有潛在的臨床套用價值。
