骨橋蛋白在樹突狀細胞對B肝病毒識別中作用的研究

《骨橋蛋白在樹突狀細胞對B肝病毒識別中作用的研究》是依託浙江大學，由刁宏燕擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：骨橋蛋白在樹突狀細胞對B肝病毒識別中作用的研究
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：刁宏燕
• 項目類別：面上項目

項目摘要

慢B肝是肝硬化和肝細胞癌的主要病因，且B肝慢性化機制不甚明了。樹突狀細胞（DC）的成熟障礙和抗原提呈功能缺陷是機體無法發揮免疫清除效應的主要原因之一。闡明DC功能的調節機制是治療慢B肝的迫切需要。骨橋蛋白（OPN）作為一種細胞因子,參與多種感染性疾病的發生髮展。我們前期研究發現B肝病毒刺激後DC的表面分子表達、細胞因子產生與OPN水平相關，因此推測OPN參與了DC的成熟及對B肝病毒抗原的提呈作用。本課題首先利用OPN基因敲除小鼠、B肝病毒轉基因小鼠、抗體阻斷OPN功能等進行體內、體外實驗，研究B肝病毒抗原刺激後OPN對DC成熟、抗原提呈及誘導T細胞分化的調節作用及機制。其後，利用慢B肝患者樣本檢測OPN與DC成熟及功能的關係，通過阻斷OPN、體外B肝病毒抗原刺激等方法，研究B肝病毒感染後OPN對人源DC功能的調節作用，為闡明慢B肝的發病機制，尋找有效的分子治療靶點提供理論基礎。

結題摘要

樹突狀細胞（DC）的成熟障礙和抗原提呈功能缺陷，是機體不能發揮免疫清除效應的主要原因之一。闡明DC功能的調節機制是治療慢B肝的迫切需要。骨橋蛋白（OPN）作為一種細胞因子,參與多種感染性疾病的發生髮展過程。本課題利用慢B肝患者樣本檢測OPN與DC成熟及功能的關係；通過阻斷OPN、體外B肝抗原刺激等方法，研究B肝病毒感染後OPN對人源DC功能的調節作用。其後，利用OPN基因敲除小鼠、抗體阻斷等手段進行體內、體外實驗研究B肝病毒抗原刺激後OPN對DC成熟及抗原提呈誘導T細胞分化的調節作用及機制。我們發現，慢性B肝患者DC產生OPN的量明顯低於健康志願者。我們發現B肝病毒刺激後DC的表面分子表達與細胞因子的產生與OPN水平有關。在HBV抗原刺激DC時，OPN的缺乏影響DC的IL-12的生產和DC表面共刺激分子的表達。DC功能缺陷導致了對HBV 抗原的Th1反應的降低。此外， DC中OPN的缺失，降低了HBV抗原誘導的小鼠肝臟炎症反應。更重要的是，在體外培養中OPN可以大大促進CHB患者的DC成熟。也發現OPN可明顯促進外周血單個核細胞產生IP-10，加重炎症反應。刀豆蛋白A（ConA）誘導的肝炎是一種暴發性肝損傷的小鼠模型，OPN的增加是造成ConA誘導肝損傷的重要原因，ConA肝炎中肝臟中OPN主要來源於活化的自然殺傷性T（NKT）細胞。在小鼠注射ConA前口服病原菌或慶大黴素，致病菌的給予加劇了肝臟的損害，而慶大黴素可以減輕肝損傷。在ConA誘導的肝炎中致病菌可以下調活化的NKT。另外，在我們的實驗中，肝臟NKT的數量和肝損傷的程度呈負相關。此外，病原菌處理的ConA肝炎組腸道DC明顯增加。派氏淋巴結和肝臟的DC的活化狀態與腸道DC相似。病原菌干預促進了肝臟及腸道中中OPN水平的升高。然而，腸道革蘭陰性菌的清除可以減輕ConA誘導的肝損傷，通過抑制肝臟NKT細胞活化和DC在肝臟和小腸的歸巢。體外實驗表明，病原菌刺激DC啟動了NKT細胞殺傷肝實質細胞的作用。這些結果表明，OPN可以啟動DC對抗原的免疫反應以及增強DC的成熟和功能，可能對於進一步提高DC疫苗的效果發揮作用。