基本介紹
- 書名：食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測定 免疫親和層析淨化高效液相色譜法
- 作者：中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局 中國國家標準化管理委員會
- 出版日期：2009年4月1日
- 語種：簡體中文
- ISBN：155066136952
- 外文名：Determination of Deoxynivalenol In Food-High Performance Liquid Chromatographic Method With Immunoaffinity Column Clean-up
- 出版社：中國標準出版社
- 頁數：4頁
- 開本：16
- 品牌：中國標準出版社
內容簡介,文摘,
內容簡介
《食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測定 免疫親和層析淨化高效液相色譜法(GB/T 23503-2009)》由中國標準出版社出版。
文摘
著作權頁：
1範圍
本標準規定了食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇含量的免疫親和層析淨化高效液相色譜測定方法。
本標準適用於糧食和糧食製品、酒類、醬油、醋、醬及醬製品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇含量的測定。
本標準的方法檢出限：糧食和糧食製品的檢出限為0.5mg/kg，酒類的檢出限為0.1mg/kg，醬油、醋、醬及醬製品的檢出限為0.1mg/kg。
2規範性引用檔案
下列檔案中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用檔案，其隨後所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用於本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協定的各方研究是否可使用這些檔案的最新版本。凡是不注日期的引用檔案，其最新版本適用於本標準。
GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法（GB/T6682－2008，ISO3696：1987，MOD）
3方法提要
用提取液提取試樣中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，經免疫親和柱淨化後，用高效液相色譜紫外檢測器測定，外標法定量。
4試劑和材料
除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規定的一級水。
4.1甲醇：色譜純。
4.2乙腈：色譜純。
4.3聚乙二醇（相對分子質量8000）。
4.4PBS清洗緩衝液：稱取8.0g氯化鈉、1.2g磷酸氫二鈉、0.2g磷酸二氫鉀、0.2g氯化鉀，用990mL水將上述試劑溶解，然後用濃鹽酸調節pH至7.0，再用水稀釋至1L。
4.5脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準品：純度≥98%。
4.6脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準儲備液：準確稱取一定量的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準品，用甲醇溶解，配成0.1mg/mL的標準儲備液，在－20℃保存，可使用3個月。
4.7脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準工作液：根據使用需要，準確吸取一定量的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準儲備液，用流動相稀釋，分別配成相當於0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL的標準工作液，4℃保存，可使用7d。
4.8脫氧雪腐鐮刀菌烯醇免疫親和柱。
4.9玻璃纖維濾紙：直徑11cm，孔徑1.5μm。
5儀器和設備
5.1天平：感量0.001g。
5.2高效液相色譜儀：配有紫外檢測器或二極體陣列檢測器。
5.3均質器：轉速大於10000r/min。
5.4高速萬能粉碎機：轉速10000r/min。
5.5玻璃注射器：10mL。
5.6試驗篩：1mm孔徑。
5.7空氣壓力泵。
6分析步驟
6.1試樣製備與提取
6.1.1糧食和糧食製品：將樣品研磨，硬質的糧食等用高速萬能粉碎機磨細並通過試驗篩（5.6），不要磨成粉末。稱取25g（精確到0.01g）磨碎的試樣於100mL容量瓶中加入5g聚乙二醇（4.3），用水定容至刻度，混勻，轉移至均質杯中，高速攪拌2min。定量濾紙過濾後以玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清，收集濾液A於乾淨的容器中。
6.1.2酒類：取脫氣酒類試樣（含二氧化碳的酒類樣品使用前先置於4℃冰櫃冷藏30min，過濾或超聲脫氣）或其他不含二氧化碳的酒類試樣20g（精確到0.01g），加入1g聚乙二醇（4.3），用水定容至25.0mL，混勻，用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清，收集濾液B於乾淨的容器中。
6.1.3醬油、醋、醬及醬製品：取樣品25g（精確到0.01g），加入5g聚乙二醇（4.3），用水定容至100.0mL，高速攪拌提取2min。定量濾紙過濾後，用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清，收集濾液C於乾淨的容器中。
6.2淨化
將免疫親和柱連線於玻璃注射器（5.5）下，準確移取6.1中濾液A或B或C20.mL，注入玻璃注射器中。將空氣壓力泵與玻璃注射器相連線，調節壓力，使溶液以約1滴/s的流速通過免疫親和柱，直至空氣進入親和柱中。用5mLPBS清洗緩衝液（4.4）和5mL水先後淋洗免疫親和柱，流速約為1滴/s～2滴/s，直至空氣進入親和柱中，棄去全部流出液，抽乾小柱。
6.3洗脫
準確加入1.0mL甲醇洗脫，流速約為1滴/s，收集全部洗脫液於乾淨的玻璃試管中，HPLC測定。
6.4高效液相色譜參考條件
a）色譜柱：C18柱，5μm，150mm×4.6mm或相當者；
b）流動相：甲醇+水（20+80）；
c）流速：0.8mL/min；
d）柱溫：35℃；
e）進樣量：50μL；
f）檢測波長：218nm。
6.5定量測定
以脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準工作液濃度為橫坐標，以峰面積積分值為縱坐標，繪製標準工作曲線，用標準工作曲線對試樣進行定量，標準工作溶液和試樣溶液中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的回響值均應在儀器檢測線性範圍內。在上述色譜條件下，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準品色譜圖參見圖A.1。
6.6空白試驗
除不加試樣外，空白試驗應與測定平行進行，並採用相同的分析步驟。
6.7平行試驗
按以上步驟，對同一試樣進行平行試驗測定。
7結果計算
試樣中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的含量按式（1）計算：
1範圍
本標準規定了食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇含量的免疫親和層析淨化高效液相色譜測定方法。
本標準適用於糧食和糧食製品、酒類、醬油、醋、醬及醬製品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇含量的測定。
本標準的方法檢出限：糧食和糧食製品的檢出限為0.5mg/kg，酒類的檢出限為0.1mg/kg，醬油、醋、醬及醬製品的檢出限為0.1mg/kg。
2規範性引用檔案
下列檔案中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用檔案，其隨後所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用於本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協定的各方研究是否可使用這些檔案的最新版本。凡是不注日期的引用檔案，其最新版本適用於本標準。
GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法（GB/T6682－2008，ISO3696：1987，MOD）
3方法提要
用提取液提取試樣中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，經免疫親和柱淨化後，用高效液相色譜紫外檢測器測定，外標法定量。
4試劑和材料
除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規定的一級水。
4.1甲醇：色譜純。
4.2乙腈：色譜純。
4.3聚乙二醇（相對分子質量8000）。
4.4PBS清洗緩衝液：稱取8.0g氯化鈉、1.2g磷酸氫二鈉、0.2g磷酸二氫鉀、0.2g氯化鉀，用990mL水將上述試劑溶解，然後用濃鹽酸調節pH至7.0，再用水稀釋至1L。
4.5脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準品：純度≥98%。
4.6脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準儲備液：準確稱取一定量的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準品，用甲醇溶解，配成0.1mg/mL的標準儲備液，在－20℃保存，可使用3個月。
4.7脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準工作液：根據使用需要，準確吸取一定量的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準儲備液，用流動相稀釋，分別配成相當於0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL的標準工作液，4℃保存，可使用7d。
4.8脫氧雪腐鐮刀菌烯醇免疫親和柱。
4.9玻璃纖維濾紙：直徑11cm，孔徑1.5μm。
5儀器和設備
5.1天平：感量0.001g。
5.2高效液相色譜儀：配有紫外檢測器或二極體陣列檢測器。
5.3均質器：轉速大於10000r/min。
5.4高速萬能粉碎機：轉速10000r/min。
5.5玻璃注射器：10mL。
5.6試驗篩：1mm孔徑。
5.7空氣壓力泵。
6分析步驟
6.1試樣製備與提取
6.1.1糧食和糧食製品：將樣品研磨，硬質的糧食等用高速萬能粉碎機磨細並通過試驗篩（5.6），不要磨成粉末。稱取25g（精確到0.01g）磨碎的試樣於100mL容量瓶中加入5g聚乙二醇（4.3），用水定容至刻度，混勻，轉移至均質杯中，高速攪拌2min。定量濾紙過濾後以玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清，收集濾液A於乾淨的容器中。
6.1.2酒類：取脫氣酒類試樣（含二氧化碳的酒類樣品使用前先置於4℃冰櫃冷藏30min，過濾或超聲脫氣）或其他不含二氧化碳的酒類試樣20g（精確到0.01g），加入1g聚乙二醇（4.3），用水定容至25.0mL，混勻，用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清，收集濾液B於乾淨的容器中。
6.1.3醬油、醋、醬及醬製品：取樣品25g（精確到0.01g），加入5g聚乙二醇（4.3），用水定容至100.0mL，高速攪拌提取2min。定量濾紙過濾後，用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清，收集濾液C於乾淨的容器中。
6.2淨化
將免疫親和柱連線於玻璃注射器（5.5）下，準確移取6.1中濾液A或B或C20.mL，注入玻璃注射器中。將空氣壓力泵與玻璃注射器相連線，調節壓力，使溶液以約1滴/s的流速通過免疫親和柱，直至空氣進入親和柱中。用5mLPBS清洗緩衝液（4.4）和5mL水先後淋洗免疫親和柱，流速約為1滴/s～2滴/s，直至空氣進入親和柱中，棄去全部流出液，抽乾小柱。
6.3洗脫
準確加入1.0mL甲醇洗脫，流速約為1滴/s，收集全部洗脫液於乾淨的玻璃試管中，HPLC測定。
6.4高效液相色譜參考條件
a）色譜柱：C18柱，5μm，150mm×4.6mm或相當者；
b）流動相：甲醇+水（20+80）；
c）流速：0.8mL/min；
d）柱溫：35℃；
e）進樣量：50μL；
f）檢測波長：218nm。
6.5定量測定
以脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準工作液濃度為橫坐標，以峰面積積分值為縱坐標，繪製標準工作曲線，用標準工作曲線對試樣進行定量，標準工作溶液和試樣溶液中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的回響值均應在儀器檢測線性範圍內。在上述色譜條件下，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標準品色譜圖參見圖A.1。
6.6空白試驗
除不加試樣外，空白試驗應與測定平行進行，並採用相同的分析步驟。
6.7平行試驗
按以上步驟，對同一試樣進行平行試驗測定。
7結果計算
試樣中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的含量按式（1）計算：
