《靶嚮導入miR-101沉默EZH2調控前列腺癌幹細胞侵襲機制的研究》是依託中山大學，由許可慰擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：靶嚮導入miR-101沉默EZH2調控前列腺癌幹細胞侵襲機制的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：許可慰
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
前列腺癌幹細胞被認為是前列腺癌進展、復發的根源，EZH2基因的擴增促進了前列腺癌幹細胞的分化增殖。我們的前期研究發現miR-101與EZH2密切相關，miR-101的缺失將導致EZH2的擴增。如何特異性導入miR-101來阻斷前列腺癌幹細胞中EZH2的表達，是miRNA靶向治療前列腺癌的關鍵。前列腺幹細胞抗原(PSCA)是前列腺癌幹細胞的高度特異性生物標誌，本研究擬以PSCA啟動子修飾慢病毒，構建PSCA-(pre-miR-101)-Lentivirus重組載體，實現對前列腺癌幹細胞特異性導入miR-101的目的。然後在體外培養系統中觀察其對前列腺癌幹細胞增殖、侵襲等生物學行為的調控，並在荷瘤鼠體內檢測其對成瘤能力和侵襲特性的影響，從而探索miRNA靶向治療前列腺癌的新途徑。
結題摘要
前列腺癌幹細胞被認為是前列腺癌進展、復發的根源，EZH2基因的擴增促進了前列腺癌幹細胞的分化增殖。我們的前期研究發現miR-101與EZH2密切相關，miR-101的缺失將導致EZH2的擴增。本實驗通過流式雙標分選前列腺癌幹細胞LNCaP，通過球囊形成、化療耐藥、軟瓊脂克隆等試驗驗證腫瘤幹細胞的乾性，證實了流式分選可以獲得具有腫瘤幹細胞特性的一群細胞（前列腺癌幹細胞），western blot發現這群細胞高表達乾性轉錄因子sox2、oct4、nanog、EZH2；通過體外siRNA干擾EZH2的表達，證實EZH2對癌幹細胞的增殖，抗凋亡等發揮重要作用，通過螢光定量PCR方法初步鑑定出EZH2調控的下游基因，分析並提出EZH2調控前列腺癌幹細胞可能作用途徑；結合PIC TAR、 Target scan等軟體預測可能調控EZH2的miRNA，採用實時螢光定量PCR驗證篩選的miRNA，發現前列腺癌幹細胞中miR-101缺失是導致高EZH2的主要原因；體外導入miR-101可以降低EZH2的表達，雙螢光素酶試驗發現miR-101可以直接結合到EZH2的3’---UTR，提示前列腺癌幹細胞中，miR-101可以直接調控EZH2的表達。本研究通過闡明EZH2及其下游因子在前列腺癌幹細胞中的作用機理，為靶向治療前列腺癌提供新的思路和理論依據，有利於發現新型的抗前列腺癌藥物，具有重要的理論，臨床意義。達到了國際先進水平。
