《靶向干預MDM2/VEGF信號途徑逆轉乳腺癌血管生成的實驗研究》是依託華中科技大學，由周晟擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：靶向干預MDM2/VEGF信號途徑逆轉乳腺癌血管生成的實驗研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：周晟
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
現已知血管內皮生長因子(VEGF)和癌蛋白MDM2在多數乳腺癌患者的腫瘤細胞中均有過度表達，而它們的高表達與預後較差及化療不佳關係密切。我們首次於體外觀察到乳腺癌細胞在低氧刺激後，核內MDM2可向胞漿移位，且該過程伴有VEGF表達的增高，進而發現在基因重組小鼠胚胎成纖維細胞中MDM2可與VEGF mRNA內部核糖體進入位點(IRES)結合，並促進VEGF蛋白的翻譯，但其具體機制以及在乳腺癌發生及血管形成中的作用尚未明了。本課題將在乳腺癌細胞中引入雙螢光素酶報告基因，通過蛋白質-核酸紫外交聯、GST-pull down及胺基酸代謝標記等實驗闡明低氧應激下MDM2與VEGF IRES相互作用介導VEGF翻譯的機制及可干預的相關靶點，並以此為基礎採用SELEX技術篩選小分子RNA進行阻斷，為探索合成新的抗腫瘤血管生成靶向治療藥物，降低化療抗性，逆轉乳腺癌進展提供理論基礎及實驗依據。
結題摘要
① 本項目主要研究乳腺癌細胞在低氧刺激後，核內MDM2向胞漿移位，促進VEGF表達的增高這個現象背後的機制，經過三年的努力，我們通過引入雙螢光素酶報告基因，蛋白質-核酸紫外交聯、GST-pull down及胺基酸代謝標記等體外實驗證實缺氧狀態可促使腫瘤細胞核內MDM2向細胞質轉位，細胞質內MDM2可結合VEGF mRNA的3’-UTR，增加VEGF mRNA的穩定性，進而提高腫瘤細胞內VEGF蛋白水平，敲除MDM2後可抑制VEGF的表達。 ② 項目實施後期我們通過裸鼠乳腺癌模型實驗研究了MDM2特異性小分子抑制劑nutlin-3對VEGF表達及血管生成的作用，並以反義寡核苷酸 (antisense oligonucleotide, ASO) 技術抑制MDM2作為對比，觀察到直接干預MDM2表達後抑制血管生成的效果顯著優於MDM2-p53途徑的經典阻斷分子nutlin-3。 ③ 除了上述功能實驗，我們嘗試在人體組織中檢測了相關蛋白的表達情況，驗證了Gli-1蛋白調控FOXC2可能與基底細胞型乳腺癌的預後有關，取得了預期成果。 ④ 在取得階段性成果及相關實驗數據的基礎上，我們拓展了思路，研究了一個MDM2重要的調控因子DAXX與它的關係，並發現了其對兩個重要的轉錄因子有直接的調控作用，並嘗試運用中藥小分子黃連素（BBR）提取物對信號途徑進行干預，證實BBR通過結合DAXX啟動子結合位點對其轉錄產生抑制作用，該作用受到SP1和ETS1兩個因子的介導。
