《靶向封閉炎症信號通路防治急性肺損傷的實驗研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由尹文擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：靶向封閉炎症信號通路防治急性肺損傷的實驗研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：尹文
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
核因子（NF）-kB是一種多向性核轉錄調節蛋白，參與多種炎性介質基因的轉錄和調控，是炎症免疫反應中眾多信號途徑的匯聚點。我們前期研究證實NF-kB核移位誘導炎症基因表達在失控性炎症反應（SIRS）/急性肺損傷（ALI）的病理機制中發揮關鍵作用；拮抗NF-kB活化通路抑制炎症損傷尚無特效藥物和成熟手段。本實驗運用已成功建立的創傷性ALI家兔模型，選定NF-kB信號通路的關鍵環節為突破口，利用載體/藥物技術，對體內外炎症效應細胞NF-kB核移位識別目的基因kB序列的頸瓶通路進行特異性靶向封閉；並用分子生物學、免疫學和形態學等方法證實靶向封閉炎症信號通路、調控炎症基因表達防治SIRS/ALI的可行性和有效性；為創傷性ALI篩選精確藥物靶點和尋求高效合理的治療方案提供實驗基礎和理論依據。
結題摘要
本研究利用載體/藥物技術體外培養肺泡巨噬細胞（AMs），觀察dsODNs/Lipofectamine2000對炎症介質表達和對AMs毒性的影響，確定dsODNs/Lipofectamine2000轉染的最佳濃度及時間點。並依據上述體外實驗確定NF-κB dsODNs轉染效率的基礎上，套用LPS誘導法建立家兔急性肺損傷（acute lung injury，ALI）模型，靶向封閉NF-κB炎症信號通路，分離培養從肺泡灌洗液中提取的AMs，採用RT-PCR方法檢測培養液中各種炎症介質如IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α和VCAM等的mRNA含量的變化，掃描電子顯微鏡觀察肺組織超微結構變化，Western blot法觀察NF-κB p65蛋白的核移位情況。結果表明，在炎症的急性期給予NF-κB dsODNs/Lipofectamine2000靜脈注射或霧化吸入均可明顯抑制AMs中各種炎症介質的表達，有效防止ALI的發生，並具有全身副作用小的特點。本課題為創傷性ALI篩選精確藥物靶點和尋求高效合理的治療方案提供實驗基礎和理論依據。
