非洲爪蟾卵非細胞翻譯體系

非洲爪蟾卵非細胞翻譯體系:於實驗前1天晚上在非洲爪蟾背部卵黃囊注射人絨毛膜促性腺激素800U,人工作外。第2天清晨收卵,仔細去除死卵和壞卵,以後每一步均注意去除這樣的死卵和壞卵,2%半胱氨酸(pH7.18) 去膠膜; 提取緩衝液(100mmol/L KCl.,0.1mmol/L CaCl],1mmol/LMgCl,50mmol/L 蔗糖,10mmol/L N-2- 羥乙基哌嗪-N2- 乙磺酸,pH 7.1) 洗3 5次,然後將卵傾人離心管中,儘量去除多餘的緩衝液,500xg 離心5min,再次去除多餘的緩衝報15000xg離心l5min,破卵,離心後分為3 層,上層白色物質為脂類,下層的黃色、黑色物質為卵黃顆粒和色素顆粒,中間層為所需要的卵細胞提取液,吸取中間細胞液層,儘量避免吸入上層脂類和下層色素顆粒和卵黃顆粒; 估計體積,每毫升加人細胞鬆弛素B(10g/L) 1ul,加人蛋白酶抑制劑aprotinin (10g/L) 1pl,輕柔混勻,以15000xg 轉速再次離心30min,吸取中間細胞液層,每份50ul,進行體外翻譯反應。

非洲爪蟾卵非細胞翻譯體系有著廣泛的套用前景,可表達對細胞有毒的蛋白質,易於被細胞內蛋白酶降解的蛋白和形成不溶包含體的蛋白質。可以微調反應條件,表達出細胞系統無法獲得的有功能的蛋白。可以添加稀有密碼子及共同作用因子,方便靈活地表達原核生物蛋白和真核生物蛋白。另外還可以進行共表達,對於功能基因組學的研究提供了一種有力的武器。

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