《青蒿素衍生物治療小鼠結腸炎功能靶點探究》是依託上海交通大學，由楊川華擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：青蒿素衍生物治療小鼠結腸炎功能靶點探究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：楊川華
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
克羅恩病病因未明，不能被根治，需要長期服用藥物維持緩解；現有有效藥物種類少，且免疫調節劑和生物製劑副作用不可忽視，更多高效低毒藥物亟待發現。雖然有效藥物的確切作用機制不同，但都能促進T細胞凋亡；其中療效最強的抗腫瘤壞死因子-a單克隆抗體還能促進巨噬細胞凋亡。青蒿素衍生物體外直接抑制Th1細胞和巨噬細胞產生相應細胞因子，促進小鼠脾T細胞凋亡，我們的前期工作發現：青蒿琥酯顯著減輕TNBS和DSS結腸炎卻對oxazolone結腸炎無效，此結果與抗腫瘤壞死因子-a單克隆抗體一致。青蒿素衍生物曾被用於治療類風濕性關節炎和系統性紅斑狼瘡，長期口服副作用少耐受性好。綜合已有結果我們相信青蒿素衍生物從機制上能治療克羅恩病。本課題將繼續探討青蒿素衍生物的功能靶點是否在巨噬細胞和/或樹突狀細胞上，並促進腸黏膜T細胞和/或巨噬細胞凋亡，為青蒿素衍生物臨床治療克羅恩病提供更多可信依據。
結題摘要
研究按計畫進行，野生型C57BL/6小鼠三硝基苯磺酸和葡聚糖急性結腸炎結果均顯示：青蒿琥酯的治療降低炎症因子表達水平，組織學上腸炎顯著減輕。 機制上我們進一步研究青蒿素對炎性細胞的作用，探討作用靶點。雖然克羅恩病的發病原因尚不清楚，但抗TNF-a單抗能高效控制克羅恩病活動性，說明了TNF-a所起的關鍵作用。而TNF-a主要由巨噬細胞和樹突狀細胞產生。樹突狀細胞還產生IL-12，其單克隆抗體也能有效減輕克羅恩病活動性。因此我們重點觀察了青蒿素對巨噬細胞和樹突狀細胞的作用（未見以往報導）。體外，分離骨髓細胞誘導分化成樹突狀細胞的實驗發現，青蒿琥酯通過caspase-9介導的內源性凋亡途徑（不是外源性途徑），促進樹突狀細胞凋亡。然而腹腔巨噬細胞的凋亡沒有受影響。改用人巨噬細胞白血病細胞株THP-1，得到的結果與樹突狀細胞一致。這兩種細胞都具有分裂繁殖的特點。因此，青蒿素是通過促進分裂細胞的凋亡，減少新增炎症細胞參與而減輕炎症。體內，採用沒有T細胞的RAG-1-/- C57BL/6小鼠（SCID只有BALB/c小鼠）葡聚糖結腸炎模型，觀察到青蒿琥酯促進結腸黏膜中巨噬細胞和樹突狀細胞的凋亡，顯著減少結腸炎巨噬細胞和樹突狀細胞的數量，減輕結腸炎症。綜合體內外實驗結果，我們證實了巨噬細胞和樹突狀細胞是青蒿琥酯的直接作用靶點。利用THP-1細胞株，我們還觀察到青蒿琥酯與甲氨蝶呤/硫唑嘌呤/雷公藤有協同促進細胞凋亡的作用。青蒿素促進T細胞凋亡已有報導。 機制上我們還觀察了青蒿琥酯對腸黏膜通透性的影響。青蒿琥酯治療的葡聚糖急性結腸炎黏膜損傷顯著減輕，提示了保護作用。除了組織學完整性，結腸黏膜通透性還受到多種細胞因子的調控，如TNF-a增加腸炎黏膜通透性，導致異體蛋白質不斷進入機體，免疫應答持續，炎症不愈。體外實驗中青蒿琥酯直接抑制腹腔巨噬細胞產生TNF-a。我們用FITC標記的右旋糖酐檢測葡聚糖急性結腸炎，結果顯示青蒿琥酯沒有降低腸炎的黏膜通透性，提示有其他調節因素參與而不能被青蒿素抑制。雖然不是藥物有效性的評判標準，但目前用於治療克羅恩病的有效藥物都能降低腸黏膜通透性。因此，未再進行深入實驗研究。
