《雙酚A暴露對神經嵴幹細胞良惡性分化潛能的影響》是依託復旦大學，由朱海濤擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：雙酚A暴露對神經嵴幹細胞良惡性分化潛能的影響
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：朱海濤
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
神經母細胞瘤(NB)為嬰幼兒最常見惡性實體腫瘤之一。胚胎期神經嵴幹細胞（NC）向外周交感神經元的良性分化受阻及向腫瘤幹細胞惡性轉化是NB發生的關鍵過程，誘因及機制尚不明確。環境內分泌干擾物（EED）是新近發現威脅人類健康的致病因素。申請者前期研究發現雙酚A（BPA）等EED通過β-雌激素受體（ER）介導可促進NB進展惡化。本課題擬體外誘導人多能性幹細胞分化為NC，採用雷射共聚焦顯微技術觀察不同濃度BPA對NC向交感神經元體外定向分化的影響；套用流式細胞分選技術、體外細胞克隆形成實驗及裸鼠移植瘤模型觀察BPA在NC向NB腫瘤幹細胞惡性轉化中的作用；套用螢光定量PCR及免疫印跡分析BPA對ERβ表達的影響，並運用RNAi等技術分析ERβ不同表達水平對BPA作用的影響。揭示BPA在NB發生中的作用及機制，闡明EED與NB發生的相關性，為NB的早期預防及相關公共衛生政策制定提供依據。
結題摘要
神經母細胞瘤(NB)為嬰幼兒最常見惡性實體腫瘤之一。胚胎期神經嵴幹細胞（NC）向外周交感神經元的良性分化受阻及向腫瘤幹細胞惡性轉化是NB 發生的關鍵過程，誘因及機制尚不明確。環境內分泌干擾物（EED）是新近發現威脅人類健康的致病因素。申請者前期研究發現雙酚A（BPA）等EED 通過β-雌激素受體（ER）介導可促進NB 進展惡化。本課題擬進一步探討BPA對神經嵴細胞良惡性分化的影響及作用機制。套用體外細胞試驗誘導人多能分化幹細胞（IPS）分化形成神經嵴細胞及外周交感神經元，建立幹細胞向神經嵴細胞及外周交感神經元分化的體外細胞實驗模型。運用BPA體外干預實驗觀察BPA對神經嵴細胞向外周交感神經元定向分化的影響，發現對照組與不同濃度BPA 組之間分化誘導後細胞形態學上無明顯差異，檢測各組誘導分化後的細胞中p75神經嵴細胞標記物及β-tubulin外周交感神經元標記物表達無明顯差異（P＞0.05）。進一步觀察BPA與雌二醇（E2）共同作用對神經嵴細胞向外周交感神經元定向分化的影響，發現對照組與E2及BPA干預組之間分化誘導後細胞在形態學上無明顯差異。檢測發現神經嵴細胞向外周交感神經元定向分化過程中，細胞分化調控基因TGFA/TGFα表達量明顯增高（P<0.05）。BPA與E2共同作用下可明顯抑制TGFA/TGFαmRNA及蛋白水平的表達（P<0.05）。同時觀察BPA在人神經嵴細胞向神經母細胞瘤幹細胞惡性轉化中的作用，檢測發現BPA干預組分化獲得細胞中c-kit與CD113等神經母細胞瘤幹細胞分子標記物表達水平較對照組明顯升高（P>0.05）。體外細胞克隆實驗發現BPA干預組原代及二代細胞形成克隆能力較對照組明顯增強。但體內細胞成瘤實驗未見BPA干預後分化形成的外周交感神經元細胞具有成瘤能力。通過病毒轉染建立β-ER抑制表達的神經嵴細胞，發現β-雌激素受體表達下調＋BPA干預組細胞中c-kit與CD113等神經母細胞瘤幹細胞分子標記物表達水平較對照組無明顯升高（P>0.05）。本項研究初步提示BPA具有一定的干擾神經嵴細胞向外周交感神經元細胞正常分化及促進其向神經母細胞瘤幹細胞異常惡性分化的作用，而這一作用主要是通過β-ER途徑實現的。初步揭示環境內分泌干擾物在NB發生中扮演了重要角色。
