《雌激素介導NLRP3炎性體抑制肝細胞肝癌發生的分子機制》是依託上海交通大學，由魏清擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：雌激素介導NLRP3炎性體抑制肝細胞肝癌發生的分子機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：魏清
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
肝細胞肝癌是全球發病率最高的惡性腫瘤之一, 死亡率居惡性腫瘤第三位。研究表明雌激素對肝細胞肝癌發生具有抑制作用，但其下游特異性靶分子和具體調控機制不明。NLRP3炎性體是哺乳動物細胞胞漿中一類多分子複合物，其活化可促進炎症反應。課題組前期發現，NLRP3炎性體表達失調與肝癌病理進程密切相關；雌激素及其受體ERβ對NLRP3炎性體有明顯的正調控作用，提示雌激素極有可能通過靶向NLRP3炎性體發揮抑制肝癌發生的效應，然而具體的調控機制仍有待進一步明確。為了詳盡闡明NLRP3炎性體在雌激素抑制肝癌發生中發揮的作用及可能機制，本課題擬通過體外實驗和肝癌荷瘤裸鼠模型明確雌激素誘導的NLRP3炎性體活化對細胞炎症性死亡（pyroptosis）和自噬作用的影響，並在基因和蛋白水平詳盡分析二者對肝癌細胞生存和死亡的重要調控作用，為揭示雌激素抑制肝癌發生的作用機制和錨定雌激素通路下游特異性靶標提供理論依據。
結題摘要
目的：課題組前期研究發現，E2通過靶向激活NLRP3炎性體來抑制HCC發生和進展，然而具體的調控機制仍有待進一步明確。本研究旨在探討NLRP3炎性體活化對肝癌細胞死亡途徑和自噬作用的影響。 內容：以E2刺激HepG2肝癌細胞系，分析細胞死亡率的變化，通過檢測細胞凋亡和焦亡水平，明確NLRP3炎性體活化後肝癌細胞的死亡途徑。利用RT-PCR法，real-time PCR法和western blot法檢測不同劑量E2刺激肝癌細胞時自噬相關基因和蛋白的表達變化以及自噬小體形成量的變化，並利用western blot法檢測自噬相關信號通路的磷酸化水平，從而研究NLRP3炎性體活化對肝癌細胞自噬作用的影響。套用3-MA抑制細胞自噬作用，Yvadcmk抑制caspase1活化，觀察自噬作用和細胞焦亡的相互作用關係。 結果：台盼藍實驗和LDH釋放實驗表明，E2刺激肝癌細胞後細胞死亡率顯著升高，western blot和ELISA實驗顯示，E2處理肝癌細胞前後，細胞凋亡相關蛋白的表達並無明顯差異，而E2刺激肝癌細胞後IL-1β濃度明顯升高，ERβ受體被封閉後IL-1β濃度繼而下降，表明E2及ERβ受體激活NLRP3炎性體可介導IL-1β產生和分泌，發生細胞焦亡。E2處理肝癌細胞後，LC3b和BECLIN-1基因和蛋白表達呈E2劑量依賴性降低，細胞死亡率則逐漸升高，該結果表明，E2刺激肝癌細胞，通過ERβ受體激活NLRP3炎性體，繼而可抑制細胞自噬作用。Western blot結果表明，m-TOR/AMPK通路可能參與介導自噬作用。在細胞自噬與焦亡的相互關係研究中，自噬作用被抑制再由E2刺激肝癌細胞，細胞死亡率升高，細胞焦亡被抑制再由E2刺激肝癌細胞，細胞死亡率顯著降低。 結論與研究意義：本研究表明，E2刺激肝癌細胞介導NLRP3炎性體活化，通過細胞焦亡引發肝癌細胞死亡，自噬對細胞存活起到保護性作用，E2刺激細胞可抑制自噬，促進細胞死亡。本研究將有助於闡明NLRP3炎性體在雌激素抑制HCC發生的作用及可能機制，NLRP3炎性體為有效逆轉和抑制HCC發生提供潛在的治療靶標。
