《附睪蛋白酶抑制劑(EPPIN)基因轉錄調控的分子機理》是桂耀庭為項目負責人，北京大學為依託單位的面上項目。
基本介紹
- 中文名：附睪蛋白酶抑制劑(EPPIN)基因轉錄調控的分子機理
- 項目類別 ：面上項目
- 項目負責人：桂耀庭
- 依託單位 ：北京大學
結題摘要,項目摘要,
結題摘要
附睪蛋白酶抑制因子(EPPIN)是一種在精子成熟過程中具有重要功能的蛋白酶抑制因子。在雄激素受體（AR）基因敲除小鼠睪丸中 EPPIN 基因的表達顯著下降，該結果提示 EPPIN 基因的轉錄可能受到 AR的調控，但具體的調控機制還不清楚。本項目以小鼠睪丸支持細胞系（TM4、15P-1）和附睪細胞系（PC-1和DC-2）為實驗對象，採用螢光素酶報告基因分析方法檢測雄激素及其受體對Eppin基因啟動子轉錄活性的影響。結果顯示，雄激素受體對Eppin基因啟動子轉錄活性無顯著影響，表明在小鼠睪丸支持細胞，Eppin不是雄激素受體直接調控的靶基因。 為了進一步尋找AR的靶調節基因，本項目採用數位化表達譜測序(Digital gene expression sequencing)等技術，比較成年SCARKO小鼠與WT小鼠睪丸組織、雄激素處理前後的小鼠睪丸支持細胞系TM4基因表達譜的差異，發現受雄激素上調的基因為164個，而受雄激素下調的基因有439個。相關論文發表於2012年發表於 Asian Journal of Andrology。 在數位化表達譜測序數據的基礎上，採用螢光定量RT-PCR、螢光素酶報告基因檢測、凝膠阻滯和染色質免疫沉澱等方法，確定了Ube2b基因上的雄激素反應元件。 以此前期結果為基礎，我們成功獲得2012年國家自然科學基金面上項目：雄激素調控泛素結合酶UBE2B表達的分子機理及其生物學意義(編號：31271244)，72萬元。 同時，我們在一例完全性雄激素受體不敏感綜合症患者中，發現一個新的雄激素受體突變位點，該突變導致雄激素受體的轉錄提前終止，相關論文於2012年發表在 Journal of Andrology。
項目摘要
附睪蛋白酶抑制劑(EPPIN)是一種在精子成熟過程中具有重要功能的蛋白酶抑制劑。在雄激素受體（AR）基因敲除小鼠睪丸中EPPIN基因的表達顯著下降，該結果提示EPPIN基因的轉錄可能受到AR的調控；生物信息學分析發現EPPIN基因上游啟動子區的確含有AR反應元件，但具體的調控機制還不清楚。本項目擬採用報告基因分析EPPIN基因的核心啟動子和關鍵轉錄調控元件；凝膠阻滯實驗等方法確定在體外AR與EPPIN基因調控元件的結合，採用RNA干擾和染色質免疫沉澱等方法分析細胞內AR對EPPIN基因的轉錄調控作用；採用DNA親和層析等技術分離鑑定其它參與EPPIN基因表達調控的蛋白因子，從分子水平探討EPPIN基因轉錄調控機制。該項目對於進一步闡明精子成熟的分子機理具有重要的學術意義，也將為男性不育症的治療和避孕疫苗的開發提供新的途徑。
