《閉合環形探針的製備及其在miRNA高效檢測中的套用研究》是依託重慶大學，由馮旭利擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：閉合環形探針的製備及其在miRNA高效檢測中的套用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：馮旭利
- 依託單位：重慶大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
MicroRNA (miRNA) 是一類內源性的非編碼小分子RNA，廣泛參與真核生物的生長發育、新陳代謝和應激反應等生命活動。研究表明miRNA的異常表達與多種疾病如癌症、心血管、神經紊亂性疾病等密切相關。因此，開發對miRNA有高選擇性和高靈敏度的檢測技術具有十分重要的意義。本項目擬發展一種基於分子信標的閉合環形探針，利用小環形探針所具有的雜交張力，從而實現對目標miRNA的高選擇性識別。同時我們將結合DNAzyme的信號放大作用，進一步提高miRNA檢測的靈敏度。此外，我們所設計的探針是通過目標分子的識別產生信號恢復，可以有效地降低檢測背景，提高信噪比，從而實現活細胞內miRNA的成像與定量分析。本項目提供高靈敏和高選擇性的miRNA檢測技術，將有助於進一步理解miRNA與疾病發生髮展的關係，為疾病的早期診斷及治療提供新的思路。
結題摘要
MicroRNA (miRNA)的異常表達往往與多種疾病如癌症、心血管、神經紊亂性疾病等密切相關。對生物樣本的miRNA 進行快速靈敏的檢測一方面可以幫助很好的理解疾病的發病機理，另一方面有助於實現人類疾病的早期診斷。但鑒於miRNA 序列結構的相似性極高與種類繁多等固有特點，已報導的檢測技術和表征方法在重現性和選擇性上尚無法滿足miRNA在臨床診斷方面的套用需求，因此，發展一種更加簡單、快捷、具有高選擇性和高靈敏度的miRNA 檢測方法具有十分重要的意義。為此，我們首先製備了環形探針，利用雜交張力和鏈置換，大大提高了室溫下miRNA檢測的選擇性，並實現了活細胞內miRNA的原位成像。緊接著為進一步提高檢測的靈敏度，我們在前面的工作的基礎上，引入了具有自催化性能的DNAzyme以及共軛聚合物螢光共振能量轉移的雙重信號放大效應，在保證檢測專一性的基礎上，大大地提高了檢測的靈敏度，實現了不同細胞樣本內miRNA含量的檢測，並且其檢測結果與金標準定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR）得到的結果是大體一致的，進而充分證實了我們所提出方法的準確性。為了推動檢測方法用於臨床樣本檢測的可能性，我們進一步改進了條件，最佳化了方法，在前面工作的基礎上，引入了磁珠分離技術，並利用共軛聚合物與不同染料小分子間的有效的螢光共振能量轉移，發展了多重miRNA檢測技術，以適應多樣本檢測的需要。實驗結果表明，經過最佳化和改進的檢測方法，不僅能實現多種miRNA的同時檢測，而且檢測信號還可以根據特定的邏輯門以邏輯信號的輸出，從而有望為推動與miRNA相關疾病的早期診斷與治療提高新的思路與策略。
