長角血蜱孤雌生殖種群卵黃髮生及其調控

《長角血蜱孤雌生殖種群卵黃髮生及其調控》是依託河北師範大學，由劉敬澤擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：長角血蜱孤雌生殖種群卵黃髮生及其調控
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：劉敬澤
• 依託單位：河北師範大學

項目摘要

蜱類是專性吸血的外寄生動物，傳播多種人、畜疾病且具極強的繁殖力，對人類健康和畜牧業造成極大危害，在蟲媒疾病中由蜱傳播的病原體種類最多。蜱類生殖生理學是國際上研究的熱點領域，其中卵黃髮生及其調控是該領域的核心內容。本研究以長角血蜱Haemaphysalis longicornis孤雌生殖種群為研究對象，運用生物化學、分析化學、蛋白質組學、免疫學、高效液相色譜和氣相色譜/質譜等現代生物學及其交叉學科的研究方法，在課題組前期對長角血蜱兩性生殖種群卵黃髮生深入研究的基礎上，對其孤雌生殖種群卵黃蛋白(Vitellin, Vn)的理化性質、胺基酸組成與序列分析、卵黃原蛋白（Vitellogenin,Vg）合成組織定位與合成分泌動態、卵黃髮生調控等進行研究，並與兩性生殖種群卵黃髮生進行比較，深入闡明長角血蜱卵黃髮生及其調節機理，對於揭示蜱類生殖生物學規律、生理適應對策和調節機制具有重要意義。

結題摘要

蜱類生殖生理學是研究的熱點領域，其中卵黃髮生及其調控是該領域的核心。本研究以長角血蜱孤雌生殖種群為對象，在純化出其卵黃蛋白（Vn）基礎上，對Vn的性質、Vg合成分泌動態以及卵黃髮生的調控進行了系列研究，對於揭示蜱類生殖生物學規律、適應對策和蜱的防治具有重要的科學意義，主要研究結果如下：長角血蜱孤雌生殖種群的Vn為血紅素糖脂蛋白，等電點5.4，分子量370 KD，由9個亞基組成；GC/MS分析顯示，Vn含2，4-二叔丁基苯酚、鄰苯二甲酸丁辛酯、棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、鄰苯二甲酸二異丁酯、14-甲基-十五酸甲酯和油酸甲酯7種脂類，含甘露糖、葡萄糖、鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、山梨糖、N-乙醯葡糖胺和N-乙醯半乳糖胺9種糖類。用Vn免疫BALB/c小鼠，取免疫鼠脾細胞與骨髓瘤細胞SP2/0進行融合，經3次克隆化篩選，獲得7株能穩定分泌抗Vn的單克隆抗體，即1F6、2H6、3A9、4G11和4H1，5G11和6G2。1F6和3A9亞型為IgG2a，2H6，4G11，5G11，6G2亞型為IgG2b，4H1亞型為IgG1。7株單克隆抗體均具有高度特異性，選取效價和特異性最好的1株抗體4G11進行親和力測定，測得4G11重鏈和輕鏈的分子量分別為55.8 KD和20.9 KD，親和常數（Ka）為4.6×107。採用雙抗體夾心ELISA測定各時期脂肪體、血淋巴和卵巢中Vg或Vn的含量。結果表明，中心脂肪體和外周脂肪體均合成Vg，分別在飽血後4天和產卵後2天達到高峰，血淋巴和卵巢中Vg/Vn在產卵後2天含量最高。顯示Vg由脂肪體合成，釋放到血淋巴，由發育中的卵母細胞選擇性攝取、加工成Vn，作為胚胎髮育的營養源。蛻皮激素調控長角血蜱孤雌生殖種群的卵黃髮生，但依蜱的發育期而不同。吸血期（吸血後3-5天）注射0.5、1.0μg /g（體重）劑量的20-E顯著提高Vg合成量，對Vg的合成與釋放有調節作用，其他劑量無作用；20-E對飽血期蜱（飽血當天）的卵黃髮生無作用。保幼激素JH Ⅲ對卵黃髮生無作用。從長角血蜱生殖附腺中發現一種新型防禦性抗菌多肽，命名為HIMS-defensin，HIMS-defensin基因全長349bp，是編碼79個胺基酸組成的多肽，具有明顯的抗菌活性。