銀染

銀染是檢測聚丙烯醯胺凝膠中的蛋白質，是銀離子在鹼性pH 環境下被還原成金屬銀，沉澱在蛋白質的表面上顯色的原理。銀染的方法種類很多，目前有文獻報導的就有100多種。但是其準確的染色機制還不是特別地清楚。大致的原理是銀離子在鹼性pH 環境下被還原成金屬銀，沉澱在蛋白質的表面上而顯色。由於銀染的靈敏度很高，可染出膠上低於1 ng/蛋白質點，故廣泛的用在2D 凝膠分析上，及極低蛋白含量測定的垂直凝膠中。

基本介紹

• 中文名：銀染
• 外文名：silver staining
• 實驗目的：檢測聚丙烯醯胺凝膠中的蛋白質
• 試劑：乙醇、冰醋酸（純乙酸）
• 程式：25ml冰醋酸 10% 冰醋酸

套用

這裡介紹的是我們實驗室成功運用的銀染方法，對關鍵操作及要求做了補充！主要是用於垂直凝膠電泳中低豐度蛋白的檢測！如內源性GST-Pulldown、Co-IP等實驗中相互作用蛋白的研究 。

實驗操作流程

實驗目的：檢測聚丙烯醯胺凝膠中的蛋白質。

實驗原理：在鹼性條件下，用甲醛將蛋白帶上的硝酸銀（銀離子）還原成金屬銀，以使銀顆粒沉積在蛋白帶上。染色的程度與蛋白中的一些特殊的基團有關，不含或者很少含半胱氨酸殘基的蛋白質有時候呈負染。銀染的詳細機制還不是非常清楚。

試劑：乙醇、冰醋酸（純乙酸）、乙酸鈉、硫代硫酸鈉、硝酸銀、碳酸鈉、甘氨酸或EDTA. Na2.2H2O、甲醛

實驗操作程式：

固定：30min或者更長時間 100ml 乙醇 40% 乙醇

25ml冰醋酸 10% 冰醋酸

加水到250ml

致敏：30min 75ml乙醇 30%乙醇

17g乙酸鈉 28.2g三水乙酸鈉

0.5g硫代硫酸鈉（大蘇打）

加水到終體積250ml

水洗：3 x 10min

銀染：20min 0.625g AgNO3

100ul 37%甲醛（在使用前加入）

加水到終體積250ml

水洗：2 x 1 min (注意把握時間，水洗時間長顯色速度慢，點的顏色偏黃色)

顯色：視情況而定 6.25 g Na2CO3

50ul 37%甲醛（在使用前加入）

加水到終體積250ml

終止：10min 3.65g EDTA. Na2.2H2O或者1g甘氨酸

加水到終體積250ml

保存：1%冰醋酸，4 ℃

注意事項

1．固定時間較長，則加一步水洗30min，以免膠太脆而破碎。

2．甲醛在使用前加入。

3．最好多配製一份顯色液，第一次顯色到溶液變混濁時換一份顯色液，顯色到點清晰。

4．顯色過程很快，要注意把握時間，避免染色過度。

5．銀染液和顯色液需要預冷。

6．所用器皿要很潔淨，不用手直接接觸，以免雜蛋白污染！

7．清洗用水儘量用高純度去離子水，蒸餾水更佳，可以減少背景著色。