金黃色葡萄球菌粘附素SraP糖基化的研究

《金黃色葡萄球菌粘附素SraP糖基化的研究》是依託華中科技大學，由李一榮擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：金黃色葡萄球菌粘附素SraP糖基化的研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：李一榮
• 依託單位：華中科技大學

中文摘要

PHYRE軟體預測金葡菌的Asp1、GtfA和GtfB具有糖基化轉移酶功能，基因鄰居法推測GtfB與GtfA，Asp1與Asp3等蛋白相互作用。預實驗顯示：（1）SraP在GtfA和GtfB共存時能被糖基化；（2）Pull-down實驗證實GtfA和GtfB相互作用；（3）親和純化發現Asp1與Asp3相互作用，故GtfA、GtfB和Asp1等應通過相互作用組成酶複合物調控Srap的糖基化。未來將採用基因置換與質譜分析等方法進一步證實GtfA、GtfB和Asp1等具有糖基化轉移酶功能，並通過Co-IP證實金葡菌體記憶體在酶複合物GtfAB和Asp13，然後構建GtfA△I和Asp1△I突變株（△I表示無相互作用結構域）,分析酶複合物解離對Srap糖基化、金葡菌粘附血小板以及其致感染性心內膜炎能力的影響。因此本研究不僅可明確Srap的糖基化調控機制，而且為抑制金葡菌的粘附與致病提供科學依據。

結題摘要

Srap,一種O-糖基化的糖蛋白，是金黃色葡萄球菌最重要的粘附素致病因子。在本研究中，（1）我們首先採用基因同源重組技術獲得金黃色葡萄球菌N315的GtfA和GtfB突變株，sWGA凝集素印跡試驗顯示N315的GtfA和GtfB突變株均不能糖基化Srap，同時構建了大腸桿菌SraP的糖基化模型，發現SraP只有在GtfA和GtfB共存的情況下才能被糖基化，進一步支持GtfA和GtfB為糖基化轉移酶；（2）由於N315的GtfA和GtfB突變株具有相同表型，因此我們採用酵母雙雜交技術、GST PULL-DOWN技術以及Co-IP技術檢測GtfA和GtfB的相互作用，3種方法均證實GtfA和GtfB存在相互作用，而且GtfA的DUF1975未其相互作用的重要結構域；（3）酶複合物GtfAB解離不能檢測到糖基化的SraP，說明GtfAB的完整是SraP糖基化的重要保障；（4）酶複合物GtfAB解離導致金葡菌粘附能力下降明顯；（5）酶複合物GtfAB解離不影響體外金葡菌生物膜的形成與其生長能力。