重組CD59蛋白治療創傷性脊髓損傷及其免疫學機制的研究

《重組CD59蛋白治療創傷性脊髓損傷及其免疫學機制的研究》是依託武漢大學，由尤濤擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：重組CD59蛋白治療創傷性脊髓損傷及其免疫學機制的研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：尤濤
• 依託單位：武漢大學

項目摘要

創傷性脊髓損傷截癱發生率高，迄今仍無有效的治療方法。研究表明繼發的補體激活扮演了十分重要的角色,抑制補體激活可減輕脊髓的損害。但近年的研究證實，補體激活亦有助於脊髓損傷的再生修復。故通過抑制補體激活進行治療的方法，值得商榷。MAC是補體的終末效應物，在脊髓炎性病變中可在細胞膜上形成孔隙；亦可激活血小板，及產生損傷物質NO，加重損害；而未完全形成的Sublytic（亞溶性）MAC又可促進脊髓細胞的再生修復。創傷性脊髓損傷產生大量的MAC，可能執行同樣的功能。故如能抑制MAC的形成，促進Sublytic MAC的生產可能有效的治療脊髓損傷。CD59蛋白是MAC形成抑制物。我們嘗試用基因工程技術重組鼠的CD59蛋白，檢測它的生物學活性，用體外的補體激活實驗和小鼠脊髓損傷的體內模型來檢測其在減少脊髓細胞損傷，促進脊髓修復的效應。並嘗試闡明以上的作用機制，為創傷性脊髓損傷建立新的免疫治療方法。

結題摘要

創傷性脊髓損傷截癱發生率高，迄今仍無有效的治療方法。研究表明繼發的補體激活扮演了十分重要的角色,抑制補體激活可減輕脊髓的損害。但近年的研究證實，補體激活亦有助於脊髓損傷的再生修復。故通過抑制補體激活進行治療的方法，值得商榷。MAC是補體的終末效應物，在脊髓炎性病變中可在細胞膜上形成孔隙來加重損害；而未完全形成的Sublytic（亞溶性）MAC又可促進脊髓細胞的再生修復。故如能抑制MAC的形成，促進Sublytic MAC的產生可能有效的治療脊髓損傷。CD59蛋白是MAC形成的有效抑制物，可否利用基因工程技術重組CD59蛋白來抑制MAC形成，促進Sublytic（亞溶性）MAC生成，從而有利於脊髓功能的恢復。故我們開展此課題的研究。 首先，課題組根據實際經濟狀況和實驗要求，自行設計了動物的脊髓損傷儀器，並改進了小鼠脊髓損傷模型的製備方法。套用保留椎板的經棘突間入路的微侵襲的方法，成功製備了小鼠脊髓損傷模型；且其較常規的動物模型製備時間更短，副損傷更小，操作更方便，經濟性及實用性都更強。 其次，課題組利用基因工程技術分別在原核細胞及真核細胞體系重組了小鼠的CD59功能蛋白及人的CD59蛋白，並檢測它們的生物學活性。然後在體外原代培養了鼠的神經元和神經膠質細胞，並證實了血漿補體形成的MAC對他們的CDCC損傷效應，而重組蛋白CD59對其有效的保護。 最後，在脊髓損傷小鼠體內，我們檢測到了大量的MAC在損傷部形成，套用重組CD59蛋白可有效的促進脊髓損傷小鼠的功能恢復，保護了脊髓組織。體內進一步證實了MAC對脊髓損傷的影響，而抑制MAC有助於脊髓損傷功能的恢復。 我們在本課題的研究中發現，重組CD59蛋白在體外實驗中表現出較高的效價。但體內實驗結果效果不是特別明顯，查閱資料後考慮可能與CD59的天然GPI結構與血漿蛋白結合，影響其結合細胞膜有關，故我們已經開始嘗試套用細胞膜親和性納米微粒結合CD59蛋白，有利於蛋白與細胞膜的結合，提高效價。因這部分實驗跨學科，難度大，我們將在後續的課題中進一步開展。