基本介紹
- 中文學名：酶細胞化學技術
- 界：細菌界
簡介,實驗方法,樣品製備,酶細胞化學反應,基本實驗過程,
簡介
酶細胞化學技術(enzyme cytochemistry)
酶的細胞化學反應包括兩個反應: 第一反應是酶作用於底物的反應， 稱酶反應，形成的產物稱為初級反應產物;第二反應是捕捉劑與初級反應產物的作用，稱捕捉反應，產生最終反應產物：
┌────酶的細胞化學反應─────┐
│ 酶+條件 初級 捕捉劑 │
底物──→反應產物──→ 最終反應產物
（酶反應） （捕捉反應）
實驗方法
樣品製備
酶細胞化學的一個重要問題是既要保存好細胞內酶的活性，又要保存好細胞的結構，因此選擇適當的固定劑種類、濃度、固定的方式和時間是細胞化學技術的一個關鍵問題。光鏡樣品固定多選用中性福馬林或多聚甲醛,4℃、24小時，常規的石蠟包埋切片可以滿足相當一部分酶的細胞化學要求；電鏡樣品固定通常用0.5～2%戊二醛或4%多聚甲醛,4℃、2小時，再切成5～100μm的厚片用於細胞化學反應，反應後經常規的鋨酸後固定，脫水、包埋、超薄切片、至電鏡下觀察。冷凍切片能較大限度地保存酶的活性，因此是光、電鏡酶細胞化學技術中常用的方法。
酶細胞化學反應
酶細胞化學反應實際上就是孵育反應的過程，孵育液的成分主要有酶的底物、捕捉劑，保證孵育液pH的緩衝液以及有關的添加劑等。孵育的溫度和時間可根據不同的酶和組織通過實驗而確定。電鏡酶細胞化學的樣品在孵育反應後需經鋨酸後固定、梯度乙醇脫水、環氧樹脂包埋和超薄切片，至電鏡下觀察。
基本實驗過程
光鏡樣品： 固定（酶固定+結構固定）→ 冷凍切片 → 細胞化學反應
（酶反應+捕捉反應）→ 光鏡觀察
電鏡樣品： 固定（酶固定+結構固定）→切組織片→細胞化學反應
（酶反應+捕捉反應）→脫水包埋→ 超薄切片→電鏡觀察
