運用CRISPY系統治療由於放射治療引起的唾液腺功能損傷

《運用CRISPY系統治療由於放射治療引起的唾液腺功能損傷》是依託鄭州大學，由王志民擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：運用CRISPY系統治療由於放射治療引起的唾液腺功能損傷
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：王志民
• 依託單位：鄭州大學

項目摘要

每年全球有超過50萬的頭頸癌新患者。多數患者的放射性療導致半數以上的患者產生不可逆的腮腺損傷，造成唾液分泌顯著減少等症狀。本研究利用最新的CRISPY系統，首次運用腺病毒、腺相關病毒。將人水通道滲透蛋白在唾液腺細胞中表達並將其基因重組至細胞基因組，提高細胞膜的滲透性，增加唾液分泌。本研究的前期工作完成了腺病毒及腺相關病毒的構建，驗證了腺病毒表達CRISPY系統對細胞基因組進行剪下，建立了小鼠的唾液腺表達模型和小型豬的疾病模型。本研究將在前期工作的基礎上，利用兩種病毒載體實現在細胞和小鼠體內瞬時和長期表達滲透蛋白；嘗試用該雙病毒系統治療唾液腺損傷的小型豬。本研究將會為唾液腺的功能治療提供新的途徑，提高頭頸癌患者的生活質量。

結題摘要

本課題經過四年的研究從理論和細胞實驗水平上驗證了本課題的初步構想，即利用CRISPR系統利用病毒將AQP1重組進入細胞AAVS1位點，來達到既能夠短期高效表達AQP1，又能夠將其插入特定的基因組位點，從而達到長期表達的效果。同時我們的小鼠和小型化豬的實驗結果都證明了其雖然能夠在細胞水平達到我們的預期，但是在動物水平還有待提高重組效率。課題組還首次發現了Cas9單個蛋白在細胞內的表達，可以改變包括多個轉錄因子的多個蛋白的表達變化，相關結果為科研界利用CRISPR系統進行這些相關基因的調控研究，提供了很好的借鑑作用。同時我們的結果也證實通過CRISPR activation系統，加上DNM2融合蛋白，我們可以對AQP1啟動子進行去甲基化，從而提高AQP1的表達量，進而提高唾液的分泌，這些結果，為今後增加唾液分泌的基因治療提供了另外一條新的通路。因此，本課題的實施，培養了實驗室人員，發表了文章，更為重要的是為今後進行進一步的研究提供了堅定的基礎。