《迷走神經對LQT2相關KCNH2基因突變靶點的調控機制》是依託西安交通大學，由周筠擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：迷走神經對LQT2相關KCNH2基因突變靶點的調控機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：周筠
- 依託單位：西安交通大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
LQTS(long QT syndrome，LQTS)是一種由離子通道結構和功能缺陷所致的遺傳性疾病，是兒童和年輕人心源性猝死的主要原因之一。LQT2與KCNH2基因突變密切相關，但其發病機制尚不完全清楚，治療也存在很大局限性。新近研究發現自主神經與致死性心律失常有密切關係，miRNA-1是心律失常發生髮展的關鍵調控因子，心肌細胞Cx43亦參與對心電生理重構的調節。然而在LQT2的發生中迷走神經與miRNA-1及Cx43之間是否存在相互作用目前並不清楚。因此，本項目利用遺傳學和分子生物學方法對LQT2的KCNH2基因突變進行篩查定位，套用突變體轉染細胞和離體LQT2心臟模型，結合改善迷走神經張力的干預，觀察miRNA-1及Cx43對離子通道穩態及縫隙連線重構的作用及信號通路，為迷走神經對KCNH2通道功能調控機制的研究提供理論和實驗依據，為研究創新型抗心律失常的藥物提供新靶點。
結題摘要
LQTS (long QT syndrome，LQTS) 是一種由離子通道結構和功能缺陷所致的遺傳性疾病，是兒童和年輕人心源性猝死的主要原因之一。由於LQT2在遺傳學和臨床表現的多樣性和複雜化給臨床治療帶來了困難，無論藥物還是手術治療都存在很大的局限性。因此，尋找中國人LQT2相關KCNH2基因新的突變位點，為進一步研究LQT2致病機制與特點提供良好的前提。 本研究通過對LQT2疑似患者的KCNH2基因的全部外顯子進行測序比對後，發現了5個SNP位點，並成功構建KCNH2基因慢病毒表達載體，進行了病毒包裝，獲得穩定過表達KCNH2基因野生型（WT）和突變型（G572R）的HEK293細胞系。進一步本項目研究了AngII對HERG通道蛋白表達的作用及其與PKC和ROS的相互關係，探討了迷走神經遞質乙醯膽鹼（acetylcholine, ACh）對AngII引起的HERG通道蛋白表達變化的影響及可能的機制。發現AngII可使HERG蛋白成熟型的表達降低，此作用與ROS的升高，PKC及磷酸化PKCε的降低有關；而ACh對AngII引起的HERG蛋白損傷變化具有保護作用，這種作用與ROS的減少有關，與PKC及磷酸化PKCε的表達無關。本項目也研究了內質網凝集素分子伴侶鈣連蛋白Calnexin在慢病毒載體介導的WT-HERG基因和G572R-HERG基因轉染HEK293細胞中HERG蛋白合成轉運中的作用，發現在慢病毒載體介導的G572R-HERG基因轉染HEK293細胞中，顯示只有135KDa的HERG蛋白，並與內質網凝集素分子伴侶Calnexin完全重疊共定位於內質網上，說明G572R-HERG是由於轉運缺陷所引起的LQT2。內質網凝集素分子伴侶鈣連蛋白Calnexin在G572R-HERG基因轉染HEK293細胞中表達增多，說明Calnexin在蛋白的摺疊和轉運過程中起著重要的作用。在確定Calnexin在WT-HERG細胞中的變化後，進一步檢測協同分子伴侶chip在突變型及野生型中的表達。在我們的實驗中還發現HCN4通道的新變異：G1097W。HCN4-G1097W變異患者表現為完全的房室傳導阻滯。突變型HCN4-G1097W通道導致心臟If功能缺失，從而引起房室傳導阻滯。在研究LQTS的同時，我們研究了攜帶KCNJ2基因突變但為非典型ATS患者的臨床和生物物理特性。
