《辣椒素受體經由occludin和ZO-1調控頜下腺分泌的機制研究》是依託北京大學，由俞光岩擔任負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：辣椒素受體經由occludin和ZO-1調控頜下腺分泌的機制研究
- 項目負責人：俞光岩
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
我們首次發現細胞間緊密連線是辣椒素受體調控頜下腺分泌的新途徑，但辣椒素受體調控的具體分子及作用機制尚待明確。本課題擬採用免疫印跡、免疫螢光、siRNA和質粒轉染等方法檢測激活辣椒素受體對大鼠離體頜下腺和SMG-C6細胞上緊密連線蛋白表達、分布和功能的影響，在器官、細胞和分子水平證實occludin和ZO-1是辣椒素受體特異性調控的緊密連線靶分子；圍繞ERK1/2和RhoA/ROCK/MLC2通路探討辣椒素受體調控occludin和ZO-1的信號轉導途徑；特別是在炎症因子誘導的整體和細胞模型上檢測occludin和ZO-1的變化及病理生理意義，探討激活辣椒素受體經調節緊密連線分子改善頜下腺分泌功能低下的可行性。該研究將揭示辣椒素受體調控occludin和ZO-1的分子機制，豐富和完善緊密連線介導頜下腺分泌的理論，並為探討以緊密連線為靶點改善頜下腺分泌提供新的思路。
結題摘要
緊密連線是位於上皮細胞之間的蛋白複合體，是介導水和溶質經旁細胞轉運的重要途徑。本項目以頜下腺緊密連線膜蛋白occludin和胞漿蛋白ZO-1/-2為重點，明確它們的表達和分布特點，分別敲低occludin和ZO-1/-2的表達可降低跨上皮細胞電阻和增加FITC-右旋糖酐透過率，而過表達緊密連線蛋白則恢復旁細胞途徑通透性，證實occludin和ZO-1/-2是構成頜下腺緊密連線的關鍵蛋白。激活辣椒素受體可改變occludin和ZO-1/-2的細胞內分布，增加ERK1/2磷酸化。使用ERK1/2激酶抑制劑PD98059或轉染siRNA敲低ERK1/2表達後，激活辣椒素受體引起的跨上皮細胞電阻降低及occludin重分布的作用均被抑制。辣椒素可增加頜下腺組織及SMG-C6細胞GTP-RhoA和磷酸化MLC2的表達；RhoA抑制劑C3轉移酶或Rho激酶抑制劑Y27632預處理可抑制辣椒素引起的旁細胞途徑通透性增加，阻斷ZO-/-2重分布，說明激活辣椒素受體以ERK1/2依賴的方式調控occludin的功能，通過RhoA-ROCK信號通路調控ZO-1和-2分布以及緊密連線的開放。在家兔模型上，移植頜下腺緊密連線的寬度明顯減小，ZO-1等緊密連線蛋白的表達量降低。辣椒素治療可減輕移植頜下腺緊密連線的結構損傷，恢復緊密連線蛋白的表達。針對頜下腺移植患者早期分泌不足的臨床問題，我們聯合使用辣椒素和卡巴膽鹼促進腺體分泌，明顯降低移植頜下腺的導管阻塞率。該研究揭示了激活辣椒素受體調控occludin和ZO-1/-2的分子機制，為改善頜下腺分泌功能低下提供了新策略。
