《轉錄因子AhR靶向ABCG2和VEGF-B對絨癌幹細胞樣特性影響的研究》是依託中南大學，由劉惠寧擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：轉錄因子AhR靶向ABCG2和VEGF-B對絨癌幹細胞樣特性影響的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉惠寧
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
絨毛膜癌（絨癌）是發生於育齡女性的常見高度惡性腫瘤，早期即可血行轉移至全身。與其他腫瘤不同，絨癌對化療比較敏感，並可通過化療治癒。但近來絨癌耐藥日益加重，成為其治療失敗的主要原因。研究表明腫瘤幹細胞的存在可能是腫瘤發生、耐藥、轉移的重要原因。本課題組前期已成功從絨癌細胞中分離出絨癌幹細胞樣細胞，發現其高表達ABCG2；前期試驗也發現絨癌耐藥細胞高表達VEGF-B。近來研究表明芳基烴受體AhR與腫瘤發生、耐藥、轉移密切相關；研究證實AhR可上調ABCG2的表達，且我們發現VEGF-B啟動序列上也存在著AhR的結合位點，但尚未見關於AhR對VEGF-B表達調控的研究報導。本課題將以AhR對VEGF-B、ABCG2的表達調控及對絨癌幹細胞樣特性的影響為主線，率先探討AhR與VEGF-B的相互作用，並研究AhR靶向ABCG2和VEGF-B對絨癌生長、耐藥、轉移的影響和機制，有望提出絨癌治療的新線索
結題摘要
目的：絨癌是發生於生育年齡婦女的常見高度惡性腫瘤，絨癌細胞轉移到腦是絨癌致死的主要原因之一。絨癌治療以化療為主，近年來耐藥絨癌病例不斷增多，對化療耐藥是絨癌治療失敗的主要原因。腫瘤幹細胞（CSCs）是存在於腫瘤組織中一類數目極少但具有幹細胞特性的細胞亞群，具有自我更新能力和不定向分化潛能，有多藥耐藥和放化療抵抗的特點。我們以絨癌JEG-3細胞和絨癌幹細胞樣細胞為模型，以轉錄因子AhR為關鍵節點，驗證VEGF-B和ABCG2是否是AhR的靶基因並進一步對AhR與VEGF-B和ABCG2的靶向關係進行研究。為尋找減弱或逆轉絨癌耐藥、阻斷其侵襲轉移的有效方法提供新的靶點和依據。 方法：無血清懸浮培養腫瘤球形成試驗、MTS/CCK8法、克隆形成實驗、劃痕實驗、Transwell實驗、流式細胞術、裸鼠皮下成瘤實驗鑑定幹細胞樣特性及探討AhR在絨癌侵襲轉移、耐藥中的作用及對其幹細胞樣特性的影響，報告基因和免疫共沉澱驗證AhR對VEGF-B、ABCG2的調節作用。 結果：1. 懸浮培養篩選出懸浮生長、可連續傳代的微球體，高表達Oct-4、Sox-2、Nanog、CD133、CD44，較親本細胞具有更高的克隆形成率、細胞增殖率、遷移率和透膜細胞數和化療藥物MTX、VP16作用下的細胞存活率。2.絨毛膜癌幹細胞樣細胞相對高表達轉錄因子AhR， 改變AhR表達及活性影響絨癌細胞細胞增殖率、腫瘤幹細胞形成率、遷移率和透膜細胞數、移植瘤體積及化療藥物MTX、VP16作用下的細胞存活率。3.絨癌幹細胞樣細胞中VEGFB、ABCG2表達相對升高， ABCG2可以影響絨癌JEG-3細胞的腫瘤幹細胞樣細胞形成率；VEGFB可以影響絨癌JEG-3細胞的腫瘤幹細胞樣細胞遷移和侵襲細胞數。4.AhR可與VEGFB、ABCG2基因啟動子區結合。 結論：1.無血清懸浮培養法可獲得絨癌幹細胞樣細胞；2. 絨癌腫瘤幹細胞樣細胞具有更高的克隆形成能力、細胞增殖能力、對化療藥物MTX、VP16的抵抗能力、侵襲轉移能力及體外成瘤能力。3.絨癌幹細胞樣細胞較親本細胞高表達AhR，改變AhR表達及活性影響絨癌細胞幹細胞樣細胞特性。4. AhR是通過直接與VEGFB、ABCG2基因啟動子區結合進而參與對其表達調控。
