載siRNA和砷劑免疫納米微粒靶向治療胰腺癌的研究

《載siRNA和砷劑免疫納米微粒靶向治療胰腺癌的研究》是依託中山大學，由黃開紅擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：載siRNA和砷劑免疫納米微粒靶向治療胰腺癌的研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：黃開紅
• 依託單位：中山大學

中文摘要

胰腺細胞癌變是多步驟多基因突變的結果，如K-ras高突變率和抗凋亡因子Bcl-2表達上調等，這可作為RNA干擾（RNAi）沉默腫瘤生長和中藥三氧化二砷（As2O3）誘導治療的有效靶位。如何在體內把大量siRNA和As2O3定嚮導入靶細胞是套用RNAi和誘導癌細胞凋亡治療惡性腫瘤的關鍵問題。本課題擬採用我們已建立的RNAi技術、合成載基因納米和人源化單鏈抗體（ScFv）技術，使用抗CD44v6蛋白人源化單鏈抗體（ScFv）為靶向抗體，構建載siRNA和As2O3具有靶向緩釋功能的複合型免疫納米微粒，分別在體外內作用胰腺癌細胞和治療荷瘤鼠模型以評估其對高表達CD44v6蛋白胰腺癌細胞靶向性、沉默突變K-ras基因，誘導癌細胞凋亡達到抑制胰腺癌生長的抗癌作用，開發具有靶向性的載siRNA/ As2O3複合型高效低毒抗癌納米載體藥物。

結題摘要

本課題在前期工作基礎上分三部分完成。第一部分構建納米基因載體向腫瘤細胞輸送siRNA：①構建納米基因載體PEG-PLL，研究其複合siRNA能力、粒徑和表面電位、細胞毒性、轉染效率。②使用PEG-PLL將靶向突變KRAS基因的siRNA（siKRAS）導入胰腺癌PANC-1細胞內，觀察沉默突變KRAS對胰腺癌PANC-1細胞生物學功能的影響。③合成抗人粘附因子CD44v6單鏈抗體（scFvCD44v6）（前期工作基礎），構建免疫靶向納米載體scFvCD44v6-PEG-PLL，活體螢光呈像連續觀察scFvCD44v6-PEG-PLL/siRNA複合物在體內的分布，並觀察載siKRAS納米微粒的體內抑瘤效果。第二部分構建納米囊泡向腫瘤細胞輸送砷劑：①製備PEG-PDLLA/As納米微粒（As-NPs）和 scFvCD44v6-As-NPs，並詳細研究其特性；② 活體螢光呈像連續觀察scFvCD44v6-As-NPs複合物在體內的分布。③ 觀察納米砷的體內抑瘤效果。第三部分將siRNA-NPs和As-NPs聯合作用於胰腺癌細胞，在體外內實驗中觀察siRNA和砷劑的協同抗胰腺癌作用。結果顯示：PEG-PLL/siKRAS複合物轉染PANC-1細胞後可有效地沉默突變KRAS基因，抑制PANC-1細胞增殖、克隆形成能力下降、細胞周期阻滯、遷移和侵襲能力減弱、VEGF分泌減少。scFvCD44v6修飾的靶向載體能夠在體內外增加siKRAS對胰腺癌細胞的轉染，並獲得更強的抗瘤效果。scFvCD44v6修飾的載砷囊泡可在體內外提高胰腺癌細胞內的砷濃度，獲得更強的抗瘤效應。以納米微粒為載體將siKRAS與砷劑聯合套用於胰腺癌治療，在體內外均得到顯著的協同作用。本研究結果提示偶聯抗CD44v6 scFv的靶向納米載體可在體外、體內向胰腺癌細胞輸送更多的siRNA和砷劑，二者聯合套用於抗胰腺癌可獲得顯著的協同抑瘤效應。