《負載VHH抗體的乳酸桿菌防治輪狀病毒腹瀉的實驗研究》是依託四川大學，由黃英擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：負載VHH抗體的乳酸桿菌防治輪狀病毒腹瀉的實驗研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：黃英
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
輪狀病毒是引起嬰幼兒腹瀉最常見的原因，危害嚴重。目前，尚缺乏有效的防治手段。口服輪狀病毒疫苗是一種有效且簡便易行的預防方法，但其存在一些缺陷：如引起嬰兒較強烈的副反應、保護周期短、效果不理想等。已有研究表明，採用被動免疫療法可以防治輪狀病毒腹瀉，這種途徑可以克服口服輪狀病毒疫苗的一些缺陷。VHH抗體是源自駱駝和羊駝的一種只有重鏈的抗體，它具有很多獨特的優勢，尤其具有很強的耐酸、耐鹼和耐熱性，即使口服也能在胃腸道內保持較好的活性，提示VHH抗體在胃腸道感染性疾病被動免疫治療方面有潛在的套用價值。本項目擬以輪狀病毒免疫羊駝，構建抗輪狀病毒VHH噬菌體抗體庫，從中篩選具有病毒中和活性的抗體，將其轉化入乳酸桿菌，使其能在乳酸桿菌表面組成性和分泌性表達VHH抗體，在小鼠模型上觀察口服負載VHH抗體的乳酸桿菌防治輪狀病毒腹瀉的效果並探討其機理，探索一種通過被動免疫療法預防和治療輪狀病毒腹瀉的新方法。
結題摘要
輪狀病毒是引起嬰幼兒腹瀉最常見的原因，危害嚴重。目前，尚缺乏有效的防治手段。口服輪狀病毒疫苗是一種有效且簡便易行的預防方法，但其存在一些缺陷：如引起嬰兒較強烈的副反應、保護周期短、效果不理想等。已有研究表明，採用被動免疫療法可以防治輪狀病毒腹瀉，這種途徑可以克服口服輪狀病毒疫苗的一些缺陷。VHH抗體是源自駱駝和羊駝的一種只有重鏈的抗體，它具有很多獨特的優勢，尤其具有很強的耐酸、耐鹼和耐熱性，即使口服也能在胃腸道內保持較好的活性，提示VHH抗體在胃腸道感染性疾病被動免疫治療方面有潛在的套用價值。本項目以牛輪狀病毒免疫羊駝，構建抗輪狀病毒VHH噬菌體抗體庫，從中篩選具有最優病毒中和活性的VHH1抗體，構建分泌型VHH1重組質粒（pTRKH2-PsT/sVHH1）和膜表達型VHH1重組質粒（pTRKH2-PsT/aVHH1），並將構建的重組質粒分別電穿孔轉化入乳酸桿菌。酶聯免疫（ELISA）法顯示重組的乳酸桿菌可產生一定量的膜表達型或分泌型VHH1片段。掃描電鏡等顯示輪狀病毒顆粒可結合於膜表達型VHH1乳酸桿菌表面。抗體中和能力的測定結果顯示膜表達型或分泌型VHH1片段均能產生明顯的病毒中和作用。採用口服灌胃牛輪狀病毒培養液可成功複製出昆明小鼠腹瀉模型，通過觀測腹瀉嚴重性、持續性、小腸病毒負荷及腸道形態學等指標分析判斷負載膜表達型或分泌型VHH1的重組乳酸桿菌預防或治療小鼠輪狀病毒腹瀉的效果。結果顯示：口服負載膜表達型VHH1的乳酸桿菌可顯著減少輪狀病毒感染引起的小鼠腹瀉模型的發病持續時間、嚴重程度和腸道病毒量等，具有明顯的預防或治療效果。其作用機制與維持腸道菌群穩態，抑制NF-κB活化，減少炎症介質等釋放有關。口服負載膜表達型VHH1的重組乳酸桿菌可能成為一種新的防治輪狀病毒感染方法。
