《豬細胞色素P450氧化酶3A46的催化及調控分子機制》是依託華南農業大學，由蔣珺擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：豬細胞色素P450氧化酶3A46的催化及調控分子機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：蔣珺
- 依託單位：華南農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
研究參與重要內源或外旬元永源化合物代謝的豬細胞色素P450氧化酶（Cytochrome P450, CYP）的功能、結構、催化機制和調控機理，不但對獸醫藥理與毒理學研究非常重要，對於新藥研發、人類健康也同等重要。我們的前期研究結果顯示CYP3A46是豬肝臟中一個重要的代謝酶，它能代謝尼福地平晚辨、T-2和HT-2毒素。因此，本項目擬以豬CYP3A46為研究對象，對其可能的關鍵胺基酸殘基進行定點突變，確定影響其對尼福地平、T-2和HT-2毒素的特異性識別、結合、催化活性及別構作用的關鍵位點，並構建模型假說揭示其催化分子機制；利用螢光素酶報告基因系統、凝膠阻滯、染色質免疫沉澱等技術研究利福平、T-2和HT-2毒素調控CYP3A46表達的分子機制及其差異。本項目的研究結果將最終闡明CYP3A46的催化及調控分子機制，填補相關研究的空白，並可望為減少T-2毒素對畜祝悼只禽乃至人類的危害提供新的思路。
結題摘要
T-2毒素是由鐮刀菌產生的二級代謝產物，具有天然產生、性質穩員灑刪定和毒性強等特點，廣泛污染動物飼料、飼料原料及人類食品。它能直接使畜禽或人中毒甚至死亡，其在畜禽中代謝生成的毒性殘留物還可能通過肉、蛋、奶等食物間接對人類健康造成危害。因此，研究T-2毒素在動物體內的代謝轉化過程，明確催化關鍵代謝步驟的酶，闡明其催化機制和調控紙祖茅才機理，對於減少T-2毒素對畜禽甚至人類的危害有著重要的理論指導意義。我們的前期研究結果顯示CYP3A46是豬肝臟中一個重要的代謝酶，它能代謝尼福地平、T-2和HT-2毒素。然而，CYP3A46的催化分子機制及調控機理仍不清楚。本研究通過體外重組表達、點突變、螢光素酶報告基因系統、凝膠阻滯等多種實驗方法和手滲汗葛記段，系統研究CYP3A46的催化分子機制及調控機理。通過三年的研究，我們取得陵捉棵了如下成果：揭示Arg105、Ala305和Phe372這三個位點對於CYP3A46代謝T-2毒素至關重要；闡明Sp1和HNF1α分別與CYP3A46近端啟動子上的GC-box元件和遠端啟動子上的HNF1元件結合調控其本底表達，而HNF1α和PXR通過與CYP3A46遠端啟動子上的HNF1和近端DR4元件結合介導利福平對其的誘導表達。相關研究成果為有效減少T-2毒素對畜禽乃至人類的危害提供了靶標和理論依據。
