豬札幌病毒受體鑑定研究

《豬札幌病毒受體鑑定研究》是依託上海交通大學，由華修國擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：豬札幌病毒受體鑑定研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：華修國
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

札幌病毒（Sapovirus,SaV） 屬杯狀病毒科單股正鏈RNA病毒，是導致人、豬和水貂等多種易感動物罹患急性胃腸炎的重要非細菌性病原之一，主要經糞-口途徑傳播，對人畜健康構成一定威脅。研究表明，某些豬源SaV和人SaV毒株高度同源，這提示SaV可能為人畜共患病病原。迄今為止,SaV在宿主細胞表面的受體依然未知。有鑒於此，本課題以目前唯一能體外培養的豬SaV Cowden毒株為研究材料，測定經放射標記的SaV毒株與易感細胞LLC-PK在經酶及多種試劑處理前後的結合活性、感染性的變化以確定受體性質；VOPBA法確定受體分子量；免疫共沉澱、LC-MS等方法鑑定受體；病毒感染阻斷實驗和受體重建實驗驗證受體；分析受體在豬體內的組織分布和表達豐度。為揭示SaV的宿主特異性和組織親嗜性，從分子水平闡明SaV病毒感染與免疫機理，探索SaV可能的跨種間感染與傳播等科學問題提供理論依據。

結題摘要

札幌病毒（Sapovirus，SaV）屬杯狀病毒科單股正鏈RNA病毒，是導致人、豬等多種易感動物罹患急性胃腸炎的重要非細菌性病原，主要經糞口傳播。某些豬源SaV與人源SaV表現為很高的同源性，這意味著該病毒存在著潛在的公共衛生問題，對人類的健康和畜牧業的生產造成巨大危害。本研究以唯一能體外培養的豬SaV Cowden毒株為研究材料，研究SaV靶細胞受體特點；對我國流行的代表毒株CH-sav1-ah和重組毒株p2進行了全基因組序列分析和重組分析，構建SPF小型豬SaV動物疾病回歸模型，為深入研究SaV在人和動物、動物與動物之間跨種間感染與傳播機制、臨床診治，綜合防控等方面奠定基礎。主要研究內容和結果如下： （1）在首次報導豬SaV在中國豬群流行的基礎上，通過對華東、華南、華中、中原、西南等地區豬SaV感然流行病學調查證明:我國豬SaV主要流行毒株為GIII、GVIII、GX三種基因型，該病毒可引起各個年齡段豬感染，我國大部分地區存在不同程度的流行。對代表毒株CH-sav1-ah和重組毒株p2進行了全基因組序列分析和重組分析，在國內首次發現可引起仔豬腹瀉的一株重組毒株（國際上第二個被發現的重組株）。 （2）以國內分離到的豬SaV（中國豬Ch-sw-sav1）為攻毒株，通過口服感染SPF級巴馬小型豬方法，模擬自然感染髮病過程，建立豬SaV動物疾病回歸模型，觀察豬感染SaV後的主要臨床症狀、生理病理變化及RT-PCR檢測病原在各組織器官分布情況，探索Sav感染豬後，疾病的發生、發展和轉歸規律，為病原學、流行病學、臨床診斷、綜合防治等研究奠定基礎。 （3）以唯一能細胞培養的豬SaV Cowden毒株為研究材料，採用VOPBA法、質譜和Co-IP法，鑑定了豬SaV在易感細胞LLC-PK1細胞表面受體。通過VOPBA和Co-IP法進行受體的篩選，並對目的條帶用質譜方法進行蛋白質組分鑑定，結合已有的數據進行分析後得到多個候選蛋白。選取MHC-1進行進一步驗證。Co-IP結果顯示，MHC-1分子能夠與Cowden毒株相互作用。