病原
豬捷申病毒屬於小RNA病毒科腸道病毒屬,1999年病毒分類學委員會將腸道病毒屬豬腸道病毒中的11個血清型列為捷申病毒屬。
捷申病毒粒子由蛋白外殼和內部核心組成,成球形,直徑25-30nm,無
囊膜,其外層包裹核衣殼,衣殼由32個殼粒組成,無脂蛋白。病毒衣殼由4種蛋白即VP1、VP2、VP3、VP4各60個拷貝組成,其中VP1和VP3是主要免疫性抗原。病毒核心為單股正鏈RNA,約有7200個核苷酸,在氯化銫中的浮密度為1.34g/cm3 ,分子量2.5×106 u 。病毒用乙醚、氯仿等脂溶劑處理穩定,對多種消毒劑具有相應抵抗力,但它能被次氯酸鈉和70%乙醇完全滅活。在4℃時,病毒於pH3-9環境中能夠存活24h以上;56℃仍能存活30-120min。用凍乾的方法保存,會大大降低其滴度,因此大多數情況下時是用50%甘油對其保存,在4℃時可長時間維持其穩定的毒力,於-70℃則具有多年的存活期。迄今,尚未發現豬傳染性腦脊髓炎病毒有凝集和吸附紅細胞的能力。
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本病毒最易在豬源細胞上培養,例如豬腎細胞、PK-15細胞系、IBRS-2傳代細胞等,不同毒株產生的細胞病變不同,有的形成葡萄狀聚在一起從培養瓶壁上脫落,有的形成細胞周圍星狀突起。【1】李娟、馮力.甘肅農業大學、中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所.豬捷申病毒的感染及防制.1002-1957(2006)04-0043-02
豬傳染性腦脊髓炎病毒又可分為三個亞型:第一個亞型包括Konratice和Bozen等毒株,第二個亞型包括Talfan和Tyrol毒株,第三個亞型包括Reporyje毒株。血清亞型的劃分與各毒株的毒力無關。例如第二亞型中的Talfan毒株只能引起輕症疾病,而Tyrol毒株卻毒力極強,經常引起疾病嚴重的暴發,並有較高的死亡率。
Mayr&Schwobel二氏在細胞致病作用的過程中區分兩個時期,初期細胞變圓,輪廓鮮明,表現不斷增重的濃縮和顆粒性,後期細胞分解成不定型的團塊。 Kozlova,NN等人曾經研究過小豬腎小管細胞有絲分裂周期中對PEV的敏感相。實驗表明,當有絲分裂的細胞處在S期和G2期時,對病毒有抵抗力。
流行病學
1. 傳統上用“捷申病”這個名稱來表示多年前這種病較嚴重的大規模的爆發,這種爆發最早在波蘭與德國的邊境地區,以及馬達加斯加等地區爆發。從那以後,世界上其它地區也不時爆發這種疾病,但症狀較溫和。通常用其它的名稱來表示這種較溫和的發病,例如:塔爾凡病(塔爾凡是威爾斯界內一座山的名稱,這裡曾經爆發這種疾病)等,以避免實施針對“捷申病”的屠宰銷毀政策。起先捷申病出現之後,西方很多國家都錯誤地把這種病列為必須申報銷毀的疾病,後來才發現這種病毒的分布實在太廣泛了。幾年前捷申病已從歐盟的需申報疾病清單上去掉了。
2. 地理分布和危害:
1929年,本病最先發現於原捷克斯洛伐克的捷申地區,故又稱為捷申病。1931年由Klobouk氏作為一種新病而描述。隨後在中歐、西歐、北美以及澳大利亞和非洲也相繼有了報導。1955年-1957年,丹麥和英國發現豬的一種輕症麻痹病,稱為泰法病,也稱台勞病,良性地方性輕癱。後來證明其病原體也是豬傳染性腦脊髓炎病毒,只是其毒力較弱。嚴重病型只見於中歐和馬達加斯加。中歐的流行區包括原捷克斯洛伐克和奧地利以及相鄰的波蘭、南斯拉夫和匈牙利地區,在這些國家呈地方性流行。散發的病例見於瑞士、義大利北部、法國和德國。
在第二次世界大戰初期和末期,此病流行特別嚴重,自二十世紀六十年代來,本病廣泛分布於丹麥、英國、加拿大、美國和澳大利亞等地。該病發病率和死亡率都很高,可危害各種年齡的豬,造成嚴重的經濟損失。
3.我國情況:
此病毒在國內研究不是很多,哈爾濱獸醫研究所在2003年分離到血清型1型,說明我國也有該病毒存在。到目前為止,該病已經成為世界範圍內豬重要傳染病之一。
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4.流行特點:
(1).病豬和帶毒豬是本病的傳染源。病豬無論是在臨診症狀期還是在潛伏期都具有傳染性,最危險的階段是在潛伏期和發病初期。本病在發病第一天傳染率為存欄頭數的15%-40%,隨後逐漸降低。病毒主要存在於病豬的腦脊髓中,但在感染後幾周內可隨分泌物(唾液等)和排泄物(糞便)排出。外觀正常的豬,特別是4-8周齡以上的豬體內,常可以分離到病毒。說明健康豬帶毒現象或隱性感染普遍存在。只有強毒毒株才能引起暴發流行。因此,在臨診上隱性感染的豬,對疫病的傳播起著重要作用。
豬傳染性腦脊髓炎通過直接或間接接觸感染,消化道是主要的感染途徑。
隨分泌物、糞便等排出的病毒,可以通過飼料、飲水、用具、鋪墊物傳染給健康豬;工作人員也可能機械傳播。不排除鳥類、嚙齒類動物及飛蠅對病毒的傳播。
有報導,PEV還可經呼吸道傳染,但在Romanenko,VF的實驗中,曾將三頭小豬置於空氣唾沫傳染狀態下,另外兩頭在其周圍撒上病豬的尿液,都未能使其感染。
人工感染可經口、腦內或鼻內接種等方法。皮下注入病毒很難發生豬感染。PEV只感染豬,包括家豬和野豬。
幼齡仔豬,特別是2-6個月齡的斷奶仔豬和架子豬最易感染,而成年豬多為隱性感染,很少發病。哺乳仔豬的腸道中很少能夠分離到病毒,這可能是吮乳仔豬隨初乳獲得母源抗體的緣故。自然感染後豬只能產生免疫性。
實驗證明給小鼠、大鼠、豚鼠和家兔等實驗動物,以及牛、馬、羊等牲畜作人工病毒接種,不能引起感染。對雞胚也不能感染。
各血清型的致病力有較大差異,因此,發病率、死亡率和流行形式也往往不同。在新發病的豬群中,本病常呈暴髮式,逐漸蔓延全群,老疫區常為散發。
本病可在一年內的任何季節發生,但在深秋和初春更為嚴重。
(2).由血清型1型引起的腦脊髓灰質被國際獸疫局(OIE)列為B類傳染病。捷申病的發病率可達50%,病死率可達70%-90%。
本病的血清型不少於10種,不同血清型的毒株,其致病性不同,除了引起腦脊髓灰質炎外,該病還可引起母豬繁殖障礙、肺炎、下痢、心包炎和心肌炎等,並且他們之間有一定的相關性。迄今,還不清楚8、10血清型毒株的致病性,有待於進一步的研究。
豬是捷申病的唯一宿主,各種年齡的豬均易感,幼齡豬易感性最高。該病感染率雖高,但病死率卻因日齡而異,哺乳仔豬幾乎100%死亡,3周齡以上的豬症狀或陰性感染。病毒在腸道內大量繁殖,並通過糞便排除體外,,排毒時間可達數周,被污染的飼糧和飲水可經消化道再感染其他健康豬,也可通過眼結膜、生殖道和呼吸道黏膜感染。任何年齡豬都可感染多種血清型毒株,因此在同一個豬群中經常存在幾個血清型。成年豬通常具有很高的循環抗體水平,哺乳仔豬則因母乳中的抗體而不感染。當該病呈地方性流行活發生於免疫豬群時,發病主要局限在生長期幼豬和斷奶仔豬,未免疫或抗體水平抵的母豬和哺乳仔豬也可能有散發病例,在診斷時應予以注意。
致病機理
自然感染病例,豬捷申病病毒經口進入機體後,首先在扁桃體和腸道中複製,主要在咽喉部淋巴網狀組織和腸道黏膜組織中增值,與前段腸道相比,迴腸和大腸更容易感染,在感染的組織中有較高滴度。到目前為止,還不清楚腸道中哪種細胞適合病毒的複製,不過根據該病毒的試驗結果類推,可能是腸固有層中的網狀內皮組織。感染血清1型毒株後,常可引起病毒血症;但毒力較弱滴毒株,不常見其引起病毒血症。
麻痹症狀是中樞神經系統受到感染的結果。病毒是通過血液或神經的途徑達到中樞神經系統,可以分為三個階段:病毒在腸道上皮和局部淋巴結中繁殖;病毒隨著血液循環到全身;病毒在中樞神經系統繁殖。
感染過程可能在任何一個階段趨於靜止,在臨診上表現為從急性型到亞急性型和隱性型各種過渡。
臨床症狀
捷申病的臨床表現多種多樣,但以死木胎症候群為主。臨床上分為4個型:即:急性型、亞急性型、慢性型和隱性型。
1.本病潛伏期為2-28天,病豬首先出現體溫升高,多在40.0-41.1℃左右或更高,病豬表現為厭食、倦怠、嘔吐、嚴重鼻炎、腹瀉及行動失調。1-2天后,體溫降至正常,出現中樞神經系統的症狀,如:寒戰、感覺過敏、抽搐、共濟失調,四肢僵直(特別是後肢)、角弓反張和昏迷,接著發生麻痹,病豬呈犬坐姿勢或於一側臥地,前肢作划水樣,受聲響或觸摸刺激時,可引起四肢不協調的運動,或角弓反張,也可見面部麻痹和失音。病豬發生便秘。傳染性腦脊髓炎的病程發展迅猛,癱瘓出現後的2到3天,就有80%-95%的病豬可因呼吸中樞麻痹而死亡,有些病豬死於吸入性肺炎,有些病例於急性期之後食慾有所恢復,如能精心護理常可耐過,但見消瘦並有麻痹症狀。
(圖:心腔積液)
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2.該病的亞急性期為6-8天,死亡較少。
3.慢性傳染性腦脊髓炎多發於成年豬,病程為幾周到幾個月,特徵為沉鬱、行動困難、尾部麻痹、前肢癱瘓。其中有20%的病豬因肺炎、褥瘡、敗血症等原因而死亡。
4.由毒力較低的毒株引起的則症狀較輕,發病率和死亡率均較低,主要侵害仔豬。病初體溫升高,運動失調和背部軟弱。這些症狀大多可在幾天內消失,但有些病豬則隨後出現易興奮、發抖、平衡失調、運動失控、最後肢體麻痹等症狀。
(圖:組織切片觀察心肌壞死)
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病理變化
剖檢死亡豬時可檢皮下、大腸及腸系膜水腫,胸腔和心包積液、腦膜和腎皮質有出血點。組織學檢查可見腦脊髓血管周圍水腫、出血和淋巴細胞浸潤,延腦髓質中樞神經膠質細胞增生。死於本病的豬有的可見肺心葉、尖葉及中間葉有灰質實變區,肺泡及氣管內有滲出液,嚴重的有心肌壞死和漿液性纖維素性心包炎病變。有時,豬死於該病,但觀察不到特徵性的病變。
診斷方法
1.細胞分離培養:捷申病傳統的診斷技術是在細胞上分離培養,並用敏感的方法進行檢測。電子顯微鏡負染技術可在電鏡下區分其它引起神經症狀的病原,如狂犬病病毒等,但是對於同樣的小RNA病毒屬的其他成員則不能區分。免疫電鏡技術在標準陽性血清的作用下可用於病毒的鑑別診斷。
2.血清學試驗:捷申病毒的血清學診斷方法還有免疫螢光試驗(IF)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、斑點酶聯免疫吸附試驗(Dot-ELISA)及病毒中和試驗(VNT)等。目前套用最廣泛的是IF和ELISA,但由於捷申病毒多血清型的存在,最有權威的檢測方法還是VNT。其他的檢測方法如補體結合試驗等,雖然敏感,但容易產生部分血清型的交叉感染。
3.分之生物學方法:該方法是診斷疾病、檢測抗原最可靠的方法,因為生物個體間的DNA或RNA是完全特異性的。對於捷申病毒而言,它具有單股正鏈RNA,因此建立起具有針對性的RT-PCR和nested-PCR,對豬捷申病的診斷、預防具有深遠的意義。
防制措施
1.處理方法:對感染豬場實行完全隔離及對污染區實施消毒,對感染豬或同群豬作撲殺處理(這是對烈性傳染病的處理方法,原則上,捷申病已經很少爆發,所以這種方法已經很少用,也不實際)。
2.個人意見:某些文獻認為捷申病沒有治療方法,也沒有疫苗可用,而使用的預防方法主要是用後備種豬與隱性感染豬混養或接近混養,這樣可以使健康豬產生抗體。而且,豬捷申病在我國尚無爆發流行的報導,因此,搞好環境衛生、做好保健工作,加強飼養管理才是最重要的, 3.免疫接種:國內外對於本病的研究,已有較長的歷史和良好的基礎,而且已證實該病毒疫苗免疫效果良好。早期多用病豬或人工感染豬組織懸液所製成的氫氧化鋁滅活苗。20世紀50年代初期,該疫苗在東歐一些國家使用後,豬捷申病病死率從5.27%降至0.03%,在嚴重疫區,對全部易感豬注射後,未見本病的再發生;50年代末期,Mory和Correns(1959)用豬捷申病毒血清1型Konratice株在豬腎細胞連續傳100代以上,培育成功弱毒變異株.製成弱毒活疫或滅活疫苗,可誘導仔豬產生相應的保護I生抗體,採取人工攻毒(腦內接種)的方法,保護率在80%以上。
除了早期接種疫苗外,豬場還應堅持自繁自養,儘量減少外購豬的數量.而且要嚴格控制外購豬的質量。與此同時,還要加強飼養管理,特別要注意提高飼糧中能量飼料的供給,完善防寒保暖措施,提高豬群整體抗病能力。搞好豬舍的清潔衛生和消毒工作,圈舍糞尿及垃圾要天天清除,並堅持對圈舍固定時間消毒。病毒在紫外線和日光下容易死亡,在豬舍內適當地加強光照.安裝紫外燈可殺滅有效距離內的病毒,保持地面乾燥也有一定的作用。豬場一旦感染髮病.除用抗菌藥物防止細菌繼發感染外。還要採取隔離措施。防止發病豬舍的病毒傳到健康舍。要控制人員串舍,妥善處理病豬糞便,禁止貓狗肆意活動消滅老鼠,趕走飛鳥,及時用藥,隨時清除病豬或疑似病豬。目前。國內外對豬捷申病尚無有效的治療方法,也無特效抗病毒藥物.只有採取綜合防制措施,才會有效降低發病率和死亡率。
問題與展望
1 .豬捷申病毒至少從1929年以來就存在,而且還可能更早,為什麼一種病毒能夠引起多種臨床疾病的產生,各種疾病與血清型的關係,這些疾病的相關程度,豬捷申病毒血清型第8、10型的致病性等還有待於進行明確和深入研究。
2 .使用疫苗對捷申病進行預防。目前有細胞培養病毒的活疫苗和滅活疫苗,主要預防的Prv一1型病毒,對其它血清型沒有效果。這兩種疫苗目前在國內還沒有人研究。由於捷申病毒血清型多樣,使開發一種針對所有捷申病毒血清型的疫苗變得困難。
3 .在我國,引起神經症狀、母豬繁殖障礙、腸炎、肺炎、心包炎和心肌炎等症狀的疾病很多,那么捷申病毒在這些疫病中起到什麼樣的作用和扮演什麼樣的角色,目前還不清楚。同時,在我國捷申病毒流行的真實情況還是個未知數。所有這些,都有待於進一步的研究。
4 .所有的疑問和未知都鞭策我們不斷拓展研究方向和領域,尤其在細胞水平和分子水平深入地探究其感染與免疫機制,這將為以後捷申病毒的防治和疫苗的研發奠定堅實的理論、技術基礎