《谷氨酸脫羧酶疫苗誘導胰島免疫耐受的機制研究》是依託中南大學，由周智廣擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：谷氨酸脫羧酶疫苗誘導胰島免疫耐受的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：周智廣
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
與全長的谷氨酸脫羧酶（GAD）疫苗相比，我們構建的GAD肽段與IL-4共表達的增效疫苗對1型糖尿病的預防保護作用更好，其保護機制源於特異性誘導的胰島免疫耐受。調節性T（Treg）和Th17細胞是介導自身免疫應答的重要成員，兩者在功能上互相拮抗，在GAD疫苗誘導胰島免疫耐受中的作用至關重要，但其具體機制尚不清楚。因此，本課題將在前期工作的基礎上，在細胞和動物實驗兩個水平：（1）探討Treg和Th17細胞從生成到胰腺淋巴結歸巢的動態變化；（2）篩選影響Treg歸巢的關鍵上游因子；（3）通過CD25單抗封閉和RNA干擾FOXP3從蛋白質和mRNA兩個水平阻斷Treg細胞，探討Treg與Th17細胞之間的關係。這將闡明GAD疫苗發揮增效作用的免疫學機制，為人類1型糖尿病的預防研究奠定基礎。
結題摘要
我們前期構建的GAD肽段與IL-10共表達的增效疫苗（SGAD65190-315/IL-10）對1型糖尿病的預防保護作用更好，但其具體機制尚不清楚。因此，本課題將在前期工作的基礎上，探討SGAD65190-315/IL-10疫苗對1型糖尿病的預防作用的機制，旨在為1型糖尿病的預防研究提供新的思路和策略。根據課題任務書計畫我們將3-4周齡NOD雌鼠隨機分為疫苗組和對照組，分別肌注疫苗或對照質粒。觀察糖尿病發病率至30周齡。用HE染色胰腺切片來評估胰島炎。採用CFSE流式染色法檢測胰腺引流淋巴結細胞對特異性抗原GAD65和Proinsulin的刺激增殖反應。採用流式細胞術檢測小鼠脾臟和胰腺引流淋巴結CD4+CD25+Foxp3+調節性T(Treg) 細胞的頻率。用CD25單抗及免疫磁珠分選（MACS）阻斷Treg細胞及過繼轉移實驗探討可能的機制。我們的研究發現:（1）疫苗組小鼠的30周齡累計發病率為31.3%，顯著低於對照組小鼠。疫苗組小鼠的胰島炎程度顯著輕於對照組，說明了疫苗的抗糖尿病發病和改善胰島炎的作用。（2）疫苗組小鼠胰腺引流淋巴結細胞的抗原特異性增殖反應低於對照組小鼠，而小鼠脾臟及胰腺引流淋巴結中Treg細胞的比例顯著高於對照組，且呈劑量依賴性的抑制了經自身抗原GAD65活化後的效應性T細胞的增殖， 說明了疫苗誘導了GAD65特異性得 Treg細胞。（3）CD25單抗及MACS阻斷Treg細胞後，亦阻斷了SGAD65190-315/IL-10 DNA 疫苗介導的胰島炎的減輕、炎症性CD4+ Th細胞比例的下調以及對過繼轉移糖尿病的保護作用。我們的研究說明SGAD65190-315/IL-10 DNA 疫苗可能通過誘導Treg細胞發揮對NOD鼠糖尿病和胰島炎的保護作用。我們的研究可能為T1D的預防提供一種有效的措施和可靠的理論基礎。
