誘導AICD提前發生的機制與fraxinellone的免疫抑制作用

《誘導AICD提前發生的機制與fraxinellone的免疫抑制作用》是依託南京大學，由吳雪豐擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：誘導AICD提前發生的機制與fraxinellone的免疫抑制作用
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：吳雪豐
• 依託單位：南京大學

項目摘要

活化誘導的T細胞死亡（activation induced cell death，AICD）是機體維持生理平衡的重要方式，但其發生通常滯後於免疫炎症。我們前期發現，中藥成分fraxinellone可誘導FasL提前表達和抑凋亡蛋白cFLIP降解，從而促成活化T細胞AICD提前發生，使其在發揮效應前進入凋亡程式。本研究擬針對這一嶄新現象，考察fraxinellone促使AICD提前發生的時間效應；考察化合物對誘導AICD發生的上游活化因子和相關轉錄因子的影響；進一步以死亡誘導信號複合體（DISC）和cFLIP分子為中心，利用遺傳改造的模式動物和細胞株探討fraxinellone影響凋亡啟動和級聯通路的分子機理，尋找其作用靶點；闡明由該化合物代表的選擇性免疫抑制活性在自身免疫性疾病治療中的作用和意義。

結題摘要

本課題考察了中藥成分fraxinellone對活化誘導的T細胞凋亡的調控信號，闡明fraxinellone促使凋亡發生的時間效應和分子機理，探討faxinellone通過調控凋亡通路蛋白如FasL/Fas等，從而選擇性作用於活化T淋巴細胞凋亡通路的原理，探討fraxinellone影響凋亡啟動和級聯通路的分子機理，尋找其作用靶點；闡明由該化合物代表的選擇性免疫抑制活性在自身免疫性疾病治療中的作用和意義。 首先探索fraxinellone誘導凋亡的通路。用JC-1染色，用螢光顯微鏡、螢光分光光度計和流式細胞儀測定線粒體的跨膜電位，結果發現fraxinellone選擇性誘導多種方式—Con A、PHA、PMA、anti-CD3、anti-CD3 和anti-CD28等活化的T細胞線粒體的跨膜電位丟失，並呈現劑量依賴性。 考察fraxinellone選擇性誘導活化T淋巴細胞凋亡過程中激活的caspase級聯網路，結果發現fraxinellone激活了caspase-9， caspase-12和caspase-3等。而對細胞因子相關caspase-1無顯著影響。 考察fraxinellone對於PTP與cytochrome c釋放的關係。用PTP特異性抑制Cs A處理，可劑量依賴性阻斷fraxinellone選擇性誘導的活化T淋巴細胞線粒體跨膜電位的丟失，亦可部分阻斷fraxinellone選擇性誘導的活化T淋巴細胞釋放cytochrome c。 考察fraxinellone選擇性誘導活化T淋巴細胞凋亡過程中Ca2+和ROS的變化，結果發現fraxinellone不影響細胞中Ca2+和ROS，提示其他因素參與調節PTP的開啟。結果表明fraxinellone選擇性誘導活化T淋巴細胞凋亡過程中Bax和Bad轉座入活化T細胞的線粒體。 PI-3 Kinase 、CaM、MAPK相關信號通路和細胞周期相關激酶參與或調控了fraxinellone選擇性誘導活化T淋巴細胞凋亡及Bad轉座入線粒體的過程。 本研究在三個T細胞介導的免疫相關疾病動物模型上觀察了fraxinellone的治療作用。 本課題研究已投稿並接收5篇平均影響因子4以上的SCI論文，申請專利2項，培養4名研究生畢業。對照課題計畫書，已超額完成研究任務。